CAJ | 학술논문

目的:双歧杆菌已广泛应用于益生菌及发酵乳的研制.由于双歧杆菌黏附于肠黏膜表面是其发挥作用的首要条件,开展对其黏附机制的研究有着重要意义.但目前有关双歧杆菌与肠黏膜上皮细胞的黏附机制所知不多,我们从青春型双歧杆菌中分离及纯化其黏附素.方法:黏附试验为检测青春型双歧杆菌与人肠上皮细胞系Lovo细胞间的黏附.收集双歧杆菌培养上清并用300 g/L硫酸铵沉淀,在4℃下8000r/min离心30min收集沉淀物.沉淀物溶解于0.01 mol/L pH7.4 PBS,加入至0.02 mol/LpH7.0 PBS平衡的Superdex 75柱中进行洗脱,速度为0.7mL/min,226 nm波长检测光密度ABS值.收集合并活性组分,冷冻干燥.干燥物溶解后加入至0.05 mol/L pH8.0PB平衡的Q-Sepharose FF柱中,先用同一缓冲液洗脱,然后分别用含0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L及1.0mol/L氯化钠的0.05 mol/L,PB进行阶段洗脱,速度为1.5 mL/min,检测各峰黏附活性,活性组分用SDS-PAGE进行分析.结果:使用硫酸铵沉淀对双歧杆菌黏附素进行了分离,沉淀物进一步经Superdex 75凝胶过滤和Q-SepharoseFF离子交换色谱纯化.结果黏附素不能结合与Q-Sepharose柱,经SDS-PAGE分析,证实纯化的黏附素成分基本单一,其M约为16ku.结论:双歧杆菌黏附素可能为一种M 16 ku的蛋白质,并且存在于培养液上清中.
목적:쌍기간균이엄범응용우익생균급발효유적연제.유우쌍기간균점부우장점막표면시기발휘작용적수요조건,개전대기점부궤제적연구유착중요의의.단목전유관쌍기간균여장점막상피세포적점부궤제소지불다,아문종청춘형쌍기간균중분리급순화기점부소.방법:점부시험위검측청춘형쌍기간균여인장상피세포계Lovo세포간적점부.수집쌍기간균배양상청병용300 g/L류산안침정,재4℃하8000r/min리심30min수집침정물.침정물용해우0.01 mol/L pH7.4 PBS,가입지0.02 mol/LpH7.0 PBS평형적Superdex 75주중진행세탈,속도위0.7mL/min,226 nm파장검측광밀도ABS치.수집합병활성조분,냉동간조.간조물용해후가입지0.05 mol/L pH8.0PB평형적Q-Sepharose FF주중,선용동일완충액세탈,연후분별용함0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L급1.0mol/L록화납적0.05 mol/L,PB진행계단세탈,속도위1.5 mL/min,검측각봉점부활성,활성조분용SDS-PAGE진행분석.결과:사용류산안침정대쌍기간균점부소진행료분리,침정물진일보경Superdex 75응효과려화Q-SepharoseFF리자교환색보순화.결과점부소불능결합여Q-Sepharose주,경SDS-PAGE분석,증실순화적점부소성분기본단일,기M약위16ku.결론:쌍기간균점부소가능위일충M 16 ku적단백질,병차존재우배양액상청중.