微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
4期
504-509
,共6页
热带假丝酵母%CYPA14%CYPA16%表达%P450含量
熱帶假絲酵母%CYPA14%CYPA16%錶達%P450含量
열대가사효모%CYPA14%CYPA16%표체%P450함량
细胞色素P450(CYP)是一种单加氧酶,在热带假丝酵母(Candida tropicalis)ω-氧化过程中发挥关键作用.通过对来源不同的P450基因进行同源性分析,首先克隆到热带假丝酵母1230中P450基因的部分序列,再利用基因组步行法克隆其未知序列,结果分别获得了两个P450同工酶基因CYPA14和CYPA16的完整序列.经PCR方法证实,二者在染色体上的位置相邻,其读码框分别编码522和540个氨基酸残基的肽链.经NCBI BLAST搜索比较后发现,二者与热带假丝酵母ATCC 20336中的P450成员CYP52A14和CYP52A16分别编码的序列几乎完全一致,与热带假丝酵母ATCC 750中的P450成员CYP52A2和CYP52A1也具有较高的相似性.同时,对经诱变后的几株二元酸生产菌株的CYPA14与CYPA16也进行了克隆和序列比较,发现部分序列中的个别氨基酸残基发生了突变.CYPA14和CYPA16均在酿酒酵母中获得了有效表达,其中CYPA16的P450表达含量高于CYPA14,后者有部分表达产物发生了变性.
細胞色素P450(CYP)是一種單加氧酶,在熱帶假絲酵母(Candida tropicalis)ω-氧化過程中髮揮關鍵作用.通過對來源不同的P450基因進行同源性分析,首先剋隆到熱帶假絲酵母1230中P450基因的部分序列,再利用基因組步行法剋隆其未知序列,結果分彆穫得瞭兩箇P450同工酶基因CYPA14和CYPA16的完整序列.經PCR方法證實,二者在染色體上的位置相鄰,其讀碼框分彆編碼522和540箇氨基痠殘基的肽鏈.經NCBI BLAST搜索比較後髮現,二者與熱帶假絲酵母ATCC 20336中的P450成員CYP52A14和CYP52A16分彆編碼的序列幾乎完全一緻,與熱帶假絲酵母ATCC 750中的P450成員CYP52A2和CYP52A1也具有較高的相似性.同時,對經誘變後的幾株二元痠生產菌株的CYPA14與CYPA16也進行瞭剋隆和序列比較,髮現部分序列中的箇彆氨基痠殘基髮生瞭突變.CYPA14和CYPA16均在釀酒酵母中穫得瞭有效錶達,其中CYPA16的P450錶達含量高于CYPA14,後者有部分錶達產物髮生瞭變性.
세포색소P450(CYP)시일충단가양매,재열대가사효모(Candida tropicalis)ω-양화과정중발휘관건작용.통과대래원불동적P450기인진행동원성분석,수선극륭도열대가사효모1230중P450기인적부분서렬,재이용기인조보행법극륭기미지서렬,결과분별획득료량개P450동공매기인CYPA14화CYPA16적완정서렬.경PCR방법증실,이자재염색체상적위치상린,기독마광분별편마522화540개안기산잔기적태련.경NCBI BLAST수색비교후발현,이자여열대가사효모ATCC 20336중적P450성원CYP52A14화CYP52A16분별편마적서렬궤호완전일치,여열대가사효모ATCC 750중적P450성원CYP52A2화CYP52A1야구유교고적상사성.동시,대경유변후적궤주이원산생산균주적CYPA14여CYPA16야진행료극륭화서렬비교,발현부분서렬중적개별안기산잔기발생료돌변.CYPA14화CYPA16균재양주효모중획득료유효표체,기중CYPA16적P450표체함량고우CYPA14,후자유부분표체산물발생료변성.
