中国癌症杂志
中國癌癥雜誌
중국암증잡지
CHINA ONCOLOGY
2007年
1期
37-40
,共4页
李富骊%何建行%邱源%刘启才%徐鑫%熊信国
李富驪%何建行%邱源%劉啟纔%徐鑫%熊信國
리부려%하건행%구원%류계재%서흠%웅신국
CMVE-pCEA嵌合启动子%HSV-TK/CD基因%内部核糖体进入位点%真核表达
CMVE-pCEA嵌閤啟動子%HSV-TK/CD基因%內部覈糖體進入位點%真覈錶達
CMVE-pCEA감합계동자%HSV-TK/CD기인%내부핵당체진입위점%진핵표체
背景与目的:本研究构建CEA启动子和CMV增强子调控表达的HSV-TK和CD基因双顺反子真核表达载体CMVE-pCEA-TK-IRES-CD.方法:根据特异性引物PCR扩增获得CEA启动子(pCEA),巨细胞病毒的早期基因增强子(CMVE)序列,用基因重组的方法替换载体PIRES-EGFP通用启动子pCMV,得到重组质粒CMVE-PCEA-IRES-EGFP,转染重组质粒到表达CEA的肺癌细胞株中进行绿色荧光蛋白检测,确定启动子能有效启动报告基因在CEA阳性的肺癌细胞中的表达.用PCR扩增得到目的基因HSV-TK和CD,将目的基因HSV-TK和CD亚克隆到载体CMVE-pCEA-IRES-EGFP上,得到自杀基因HSV-TK/CD双表达载体CMVE-pCEA-TK-IRES-CD.结果:经酶切、PCR及DNA测序鉴定,双自杀基因真核表达载体CMVE-pCEA-TK-IRES-CD已成功构建,嵌合启动子CMVE-pCEA调控下能启动下游报告基因在CEA阳性的肺癌细胞株的表达.结论:成功构建了嵌合启动子CMVE-pCEA启动的双自杀基因HSV-TK/CD真核表达载体,为下一步研究双自杀基因对于CEA阳性表达的肺癌的治疗奠定了基础.
揹景與目的:本研究構建CEA啟動子和CMV增彊子調控錶達的HSV-TK和CD基因雙順反子真覈錶達載體CMVE-pCEA-TK-IRES-CD.方法:根據特異性引物PCR擴增穫得CEA啟動子(pCEA),巨細胞病毒的早期基因增彊子(CMVE)序列,用基因重組的方法替換載體PIRES-EGFP通用啟動子pCMV,得到重組質粒CMVE-PCEA-IRES-EGFP,轉染重組質粒到錶達CEA的肺癌細胞株中進行綠色熒光蛋白檢測,確定啟動子能有效啟動報告基因在CEA暘性的肺癌細胞中的錶達.用PCR擴增得到目的基因HSV-TK和CD,將目的基因HSV-TK和CD亞剋隆到載體CMVE-pCEA-IRES-EGFP上,得到自殺基因HSV-TK/CD雙錶達載體CMVE-pCEA-TK-IRES-CD.結果:經酶切、PCR及DNA測序鑒定,雙自殺基因真覈錶達載體CMVE-pCEA-TK-IRES-CD已成功構建,嵌閤啟動子CMVE-pCEA調控下能啟動下遊報告基因在CEA暘性的肺癌細胞株的錶達.結論:成功構建瞭嵌閤啟動子CMVE-pCEA啟動的雙自殺基因HSV-TK/CD真覈錶達載體,為下一步研究雙自殺基因對于CEA暘性錶達的肺癌的治療奠定瞭基礎.
배경여목적:본연구구건CEA계동자화CMV증강자조공표체적HSV-TK화CD기인쌍순반자진핵표체재체CMVE-pCEA-TK-IRES-CD.방법:근거특이성인물PCR확증획득CEA계동자(pCEA),거세포병독적조기기인증강자(CMVE)서렬,용기인중조적방법체환재체PIRES-EGFP통용계동자pCMV,득도중조질립CMVE-PCEA-IRES-EGFP,전염중조질립도표체CEA적폐암세포주중진행록색형광단백검측,학정계동자능유효계동보고기인재CEA양성적폐암세포중적표체.용PCR확증득도목적기인HSV-TK화CD,장목적기인HSV-TK화CD아극륭도재체CMVE-pCEA-IRES-EGFP상,득도자살기인HSV-TK/CD쌍표체재체CMVE-pCEA-TK-IRES-CD.결과:경매절、PCR급DNA측서감정,쌍자살기인진핵표체재체CMVE-pCEA-TK-IRES-CD이성공구건,감합계동자CMVE-pCEA조공하능계동하유보고기인재CEA양성적폐암세포주적표체.결론:성공구건료감합계동자CMVE-pCEA계동적쌍자살기인HSV-TK/CD진핵표체재체,위하일보연구쌍자살기인대우CEA양성표체적폐암적치료전정료기출.
