CAJ | 학술논문

目的克隆和序列分析深圳市白纹伊蚊核糖体DNA(rDNA)第2内转录间隔区(ITS2),并探明其rDNA ITS2核酸的特异性及不同个体在rDNA ITS2区的单核甘酸的多态性(Single Nuclear Polymorphism,SNP),以便利用ITS2基因的高度保守性及其蚊媒不种群在ITS2片段的多态性来分子鉴别白纹伊蚊.方法 PCR特异扩增白纹伊蚊rDNAITS2,利用QIAquick技术从琼脂糖胶上回收纯化扩增的目的ITS2 DNA片段,纯化后的目的ITS2 DNA片段被连接到TA载体上,在含有青霉素的琼脂糖胶平面上筛选含目的ITS2 DNA片段的阳性克隆,阳性克隆经含有青霉素的LB液体培养基培养,用UltrapureTM质粒提取试剂盒提取克隆质粒,用双酶切鉴定插入的片段大小,DNA序列分析仪分析每个蚊rDNA ITS2的序列,用生物信息系统进行白纹伊蚊rDNA ITS2 SNP的差异分析.结果 18bp全长的深圳市白纹伊蚊rDNA ITS2被克隆和序列分析,深圳市四个不同地理的白纹伊蚊rDNA ITS2的同一性为97%,而两个地方之间的比较有99%的同一性,其rDNA ITS2基因单核苷酸存在转换、颠换和缺失,在518bp的范围内有6个C→T,2个A→G的转换,3A→T,一个A→C的颠换,3个CG和一个AC缺失.结论白纹伊蚊rDNA ITS2有高度的保守性,不同个体也表现了单核苷酸的多态性.
목적 극륭화서렬분석심수시백문이문핵당체DNA(rDNA)제2내전록간격구(ITS2),병탐명기rDNA ITS2핵산적특이성급불동개체재rDNA ITS2구적단핵감산적다태성(Single Nuclear Polymorphism,SNP),이편이용ITS2기인적고도보수성급기문매불충군재ITS2편단적다태성래분자감별백문이문.방법 PCR특이확증백문이문rDNAITS2,이용QIAquick기술종경지당효상회수순화확증적목적ITS2 DNA편단,순화후적목적ITS2 DNA편단피련접도TA재체상,재함유청매소적경지당효평면상사선함목적ITS2 DNA편단적양성극륭,양성극륭경함유청매소적LB액체배양기배양,용UltrapureTM질립제취시제합제취극륭질립,용쌍매절감정삽입적편단대소,DNA서렬분석의분석매개문rDNA ITS2적서렬,용생물신식계통진행백문이문rDNA ITS2 SNP적차이분석.결과 18bp전장적심수시백문이문rDNA ITS2피극륭화서렬분석,심수시사개불동지리적백문이문rDNA ITS2적동일성위97%,이량개지방지간적비교유99%적동일성,기rDNA ITS2기인단핵감산존재전환、전환화결실,재518bp적범위내유6개C→T,2개A→G적전환,3A→T,일개A→C적전환,3개CG화일개AC결실.결론 백문이문rDNA ITS2유고도적보수성,불동개체야표현료단핵감산적다태성.