生物化学与生物物理进展
生物化學與生物物理進展
생물화학여생물물리진전
PROGRESS IN BIOCHEMISTRY AND BIOPHYSICS
2008年
3期
327-334
,共8页
朱月春%吕会茹%李丹怡%童淑芬
硃月春%呂會茹%李丹怡%童淑芬
주월춘%려회여%리단이%동숙분
siRNA干扰%葡萄糖-6-磷酸脱氢酶%人皮肤黑色素瘤%稳转细胞株%细胞周期%P53%Caspase-3
siRNA榦擾%葡萄糖-6-燐痠脫氫酶%人皮膚黑色素瘤%穩轉細胞株%細胞週期%P53%Caspase-3
siRNA간우%포도당-6-린산탈경매%인피부흑색소류%은전세포주%세포주기%P53%Caspase-3
研究表明,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)与肿瘤的发生、发展、临床表型及治疗和预后有关.为阐明G6PD与肿瘤的关系及其机理,针对人G6PD基因设计3条siRNA和一条无关序列,再据每一序列,合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-u6.2/Lenti连接,转染人皮肤黑色素瘤A375细胞,Real-time PCR筛选有效的一条siRNA,经病毒颗粒包装和病毒生产并感染A375细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,Western blotting检测siRNA干扰G6PD效率为88.83%,构建成G6PD缺陷型A375稳转细胞(A375-G6PDA).与野生型A375细胞(A375-WT)比较,A375-G6PD△的G6PD活性仅为21.53%,细胞倍增时间延长,增殖被抑制,克隆形成率降低25%(P<O.05),凋亡细胞数增加2.86倍(P<0.01),SPF增加33.8%(P<O.05),PI增加59.7%(P<0.01),G0/G1期下降27.7%(P<0.01),凋亡相关蛋白P53下降54.7%(P<O.01)、Caspase-3增加2.2倍(P<0.01)和Bcl-2降低21.7%(P>0.05),提示,G6PD缺陷可能通过下调P53蛋白表达和上调Caspase.3的表达,抑制G2/M期向G0/G1期转换的进程,促进A375的凋亡,机理有待于进一步探讨.
研究錶明,葡萄糖-6-燐痠脫氫酶(G6PD)與腫瘤的髮生、髮展、臨床錶型及治療和預後有關.為闡明G6PD與腫瘤的關繫及其機理,針對人G6PD基因設計3條siRNA和一條無關序列,再據每一序列,閤成兩條互補併含siRNA正反義鏈的DNA,退火後與含GFP的載體pRNAT-u6.2/Lenti連接,轉染人皮膚黑色素瘤A375細胞,Real-time PCR篩選有效的一條siRNA,經病毒顆粒包裝和病毒生產併感染A375細胞,G418篩選後,挑取單箇暘性剋隆放大培養,Western blotting檢測siRNA榦擾G6PD效率為88.83%,構建成G6PD缺陷型A375穩轉細胞(A375-G6PDA).與野生型A375細胞(A375-WT)比較,A375-G6PD△的G6PD活性僅為21.53%,細胞倍增時間延長,增殖被抑製,剋隆形成率降低25%(P<O.05),凋亡細胞數增加2.86倍(P<0.01),SPF增加33.8%(P<O.05),PI增加59.7%(P<0.01),G0/G1期下降27.7%(P<0.01),凋亡相關蛋白P53下降54.7%(P<O.01)、Caspase-3增加2.2倍(P<0.01)和Bcl-2降低21.7%(P>0.05),提示,G6PD缺陷可能通過下調P53蛋白錶達和上調Caspase.3的錶達,抑製G2/M期嚮G0/G1期轉換的進程,促進A375的凋亡,機理有待于進一步探討.
연구표명,포도당-6-린산탈경매(G6PD)여종류적발생、발전、림상표형급치료화예후유관.위천명G6PD여종류적관계급기궤리,침대인G6PD기인설계3조siRNA화일조무관서렬,재거매일서렬,합성량조호보병함siRNA정반의련적DNA,퇴화후여함GFP적재체pRNAT-u6.2/Lenti련접,전염인피부흑색소류A375세포,Real-time PCR사선유효적일조siRNA,경병독과립포장화병독생산병감염A375세포,G418사선후,도취단개양성극륭방대배양,Western blotting검측siRNA간우G6PD효솔위88.83%,구건성G6PD결함형A375은전세포(A375-G6PDA).여야생형A375세포(A375-WT)비교,A375-G6PD△적G6PD활성부위21.53%,세포배증시간연장,증식피억제,극륭형성솔강저25%(P<O.05),조망세포수증가2.86배(P<0.01),SPF증가33.8%(P<O.05),PI증가59.7%(P<0.01),G0/G1기하강27.7%(P<0.01),조망상관단백P53하강54.7%(P<O.01)、Caspase-3증가2.2배(P<0.01)화Bcl-2강저21.7%(P>0.05),제시,G6PD결함가능통과하조P53단백표체화상조Caspase.3적표체,억제G2/M기향G0/G1기전환적진정,촉진A375적조망,궤리유대우진일보탐토.
