应用与环境生物学报
應用與環境生物學報
응용여배경생물학보
CHINESE JOURNAL OF APPLIED & ENVIRONMENTAL BIOLOGY
2008年
1期
122-125
,共4页
刘裕兰%王中康%曹月青%夏玉先%殷幼平
劉裕蘭%王中康%曹月青%夏玉先%慇幼平
류유란%왕중강%조월청%하옥선%은유평
松材线虫%阳性对照%PCR检测%引物
鬆材線蟲%暘性對照%PCR檢測%引物
송재선충%양성대조%PCR검측%인물
建立了松材线虫PCR检测标准化阳性对照及特异性强的PCR检测体系.根据松材线虫rDNA-ITS区和BxPe12基因的特异基因序列设计引物,并从中筛选出一对特异引物cqubs01/cquba01,该引物能从松材线虫特异性扩增出196 bp片段,而不能对其他种类线虫进行扩增.基于优化PCR反应体系和反应程序,稳定的检测体系得以建立,检测灵敏度为100 ps/μL.以松材线虫基因组DNA为模板,以上述特异引物进行PCR扩增,将纯化后的PCR产物与PMD18-T载体连接之后转入大肠杆菌中,筛选出阳性克隆进行测序验证,最终获得了松材线虫的无害化阳性对照,建立了松材线虫标准化阳性对照的PCR检测体系.对来自于不同地区的12批次近100个样品进行了实际检测验证,其结果与实际发生情况一致,说明本检测体系稳定可靠.图3表2参8
建立瞭鬆材線蟲PCR檢測標準化暘性對照及特異性彊的PCR檢測體繫.根據鬆材線蟲rDNA-ITS區和BxPe12基因的特異基因序列設計引物,併從中篩選齣一對特異引物cqubs01/cquba01,該引物能從鬆材線蟲特異性擴增齣196 bp片段,而不能對其他種類線蟲進行擴增.基于優化PCR反應體繫和反應程序,穩定的檢測體繫得以建立,檢測靈敏度為100 ps/μL.以鬆材線蟲基因組DNA為模闆,以上述特異引物進行PCR擴增,將純化後的PCR產物與PMD18-T載體連接之後轉入大腸桿菌中,篩選齣暘性剋隆進行測序驗證,最終穫得瞭鬆材線蟲的無害化暘性對照,建立瞭鬆材線蟲標準化暘性對照的PCR檢測體繫.對來自于不同地區的12批次近100箇樣品進行瞭實際檢測驗證,其結果與實際髮生情況一緻,說明本檢測體繫穩定可靠.圖3錶2參8
건립료송재선충PCR검측표준화양성대조급특이성강적PCR검측체계.근거송재선충rDNA-ITS구화BxPe12기인적특이기인서렬설계인물,병종중사선출일대특이인물cqubs01/cquba01,해인물능종송재선충특이성확증출196 bp편단,이불능대기타충류선충진행확증.기우우화PCR반응체계화반응정서,은정적검측체계득이건립,검측령민도위100 ps/μL.이송재선충기인조DNA위모판,이상술특이인물진행PCR확증,장순화후적PCR산물여PMD18-T재체련접지후전입대장간균중,사선출양성극륭진행측서험증,최종획득료송재선충적무해화양성대조,건립료송재선충표준화양성대조적PCR검측체계.대래자우불동지구적12비차근100개양품진행료실제검측험증,기결과여실제발생정황일치,설명본검측체계은정가고.도3표2삼8
