滨州医学院学报
濱州醫學院學報
빈주의학원학보
JOURNAL OF BINZHOU MEDICAL COLLEGE
2008年
3期
165-168
,共4页
金琳琳%李鹏%万言珍%岳盈盈%李志会%孟红
金琳琳%李鵬%萬言珍%嶽盈盈%李誌會%孟紅
금림림%리붕%만언진%악영영%리지회%맹홍
RV SA11%VP5*%VP8*%原核表达
RV SA11%VP5*%VP8*%原覈錶達
RV SA11%VP5*%VP8*%원핵표체
目的 克隆表达轮状病毒结构蛋白VP4酶切片段VP5*、VP8*.方法 以猴轮状病毒SA11株细胞培养物提取总RNA为模板,经RT-PCR方法 获得VP5*、VP8*全长基因片段cDNA,将其重组于pET-30 a表达载体,转化大肠杆菌BL21(plyss),异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物做SDS-PAGE和Western-blotting检测,目的 产物用镍柱纯化.结果 ①重组载体在IPTG诱导下,工程菌表达的两个目的 蛋白主要以包涵体形式存在;②SDS-PAGE检测表达产物与目的 蛋白大小一致,VP5*为60 kD,VP8*为28 kD,Western-blotting检测发现两目的 蛋白所带标签可与抗体反应;③镍柱纯化获得RV SA11 VP5*、VP8*蛋白,纯度达90%.结论 ①构建表达载体pET-30a-VP5*、pET-30a-VP8*;②表达、纯化VP4蛋白的VP5*、VP8*片段.
目的 剋隆錶達輪狀病毒結構蛋白VP4酶切片段VP5*、VP8*.方法 以猴輪狀病毒SA11株細胞培養物提取總RNA為模闆,經RT-PCR方法 穫得VP5*、VP8*全長基因片段cDNA,將其重組于pET-30 a錶達載體,轉化大腸桿菌BL21(plyss),異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)誘導錶達,錶達產物做SDS-PAGE和Western-blotting檢測,目的 產物用鎳柱純化.結果 ①重組載體在IPTG誘導下,工程菌錶達的兩箇目的 蛋白主要以包涵體形式存在;②SDS-PAGE檢測錶達產物與目的 蛋白大小一緻,VP5*為60 kD,VP8*為28 kD,Western-blotting檢測髮現兩目的 蛋白所帶標籤可與抗體反應;③鎳柱純化穫得RV SA11 VP5*、VP8*蛋白,純度達90%.結論 ①構建錶達載體pET-30a-VP5*、pET-30a-VP8*;②錶達、純化VP4蛋白的VP5*、VP8*片段.
목적 극륭표체륜상병독결구단백VP4매절편단VP5*、VP8*.방법 이후륜상병독SA11주세포배양물제취총RNA위모판,경RT-PCR방법 획득VP5*、VP8*전장기인편단cDNA,장기중조우pET-30 a표체재체,전화대장간균BL21(plyss),이병기-β-D-류대반유당감(IPTG)유도표체,표체산물주SDS-PAGE화Western-blotting검측,목적 산물용얼주순화.결과 ①중조재체재IPTG유도하,공정균표체적량개목적 단백주요이포함체형식존재;②SDS-PAGE검측표체산물여목적 단백대소일치,VP5*위60 kD,VP8*위28 kD,Western-blotting검측발현량목적 단백소대표첨가여항체반응;③얼주순화획득RV SA11 VP5*、VP8*단백,순도체90%.결론 ①구건표체재체pET-30a-VP5*、pET-30a-VP8*;②표체、순화VP4단백적VP5*、VP8*편단.
