CAJ | 학술논문

为建立一种检测A型禽流感病毒(AIV)抗体的蛋白芯片,本研究以AIV总RNA为模板,RT-PCR方法扩增NP基因,与真核表达载体pFastBacHTa连接,并在昆虫细胞中表达.重组蛋白经纯化及western blot鉴定,点样于醛基包被的载玻片上,制备检测AIV抗体的蛋白芯片.确定芯片反应最佳条件为:点样浓度2 mg/mL,固定24 h,1%BSA进行封闭,一抗稀释度1:100,二抗稀释度1:2000.利用蛋白芯片分别对15个亚型流感病毒免疫血清、SPF鸡血清、抗新城疫病毒血清、抗法氏囊病毒血清和现地血清样品进行检测,通过与血凝抑制试验比较,表明建立的蛋白芯片方法具有良好的灵敏性和特异性,为AIV抗体检测及制备检测AIV不同亚型或多种病原抗体的蛋白芯片提供方法.
위건립일충검측A형금류감병독(AIV)항체적단백심편,본연구이AIV총RNA위모판,RT-PCR방법확증NP기인,여진핵표체재체pFastBacHTa련접,병재곤충세포중표체.중조단백경순화급western blot감정,점양우철기포피적재파편상,제비검측AIV항체적단백심편.학정심편반응최가조건위:점양농도2 mg/mL,고정24 h,1%BSA진행봉폐,일항희석도1:100,이항희석도1:2000.이용단백심편분별대15개아형류감병독면역혈청、SPF계혈청、항신성역병독혈청、항법씨낭병독혈청화현지혈청양품진행검측,통과여혈응억제시험비교,표명건립적단백심편방법구유량호적령민성화특이성,위AIV항체검측급제비검측AIV불동아형혹다충병원항체적단백심편제공방법.