西安交通大学学报(医学版)
西安交通大學學報(醫學版)
서안교통대학학보(의학판)
JOURNAL OF XI'AN JIAOTONG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)
2002年
4期
344-347，413
,共5页
王晓侠%李胜利%付员根%姚小宝%刘晖%宁小萱%刘志国%朱宏亮%樊代明
王曉俠%李勝利%付員根%姚小寶%劉暉%寧小萱%劉誌國%硃宏亮%樊代明
왕효협%리성리%부원근%요소보%류휘%저소훤%류지국%주굉량%번대명
热休克蛋白70%真核表达载体%构建%喉癌%表达
熱休剋蛋白70%真覈錶達載體%構建%喉癌%錶達
열휴극단백70%진핵표체재체%구건%후암%표체
目的进行促凋亡治疗喉癌实验,构建和鉴定携带反义HSP70(heat shock protein 70)基因的真核表达载体.方法将HSP70 cDNA反向克隆入pcDNA 3.1,构建CMV启动子控制的真核表达载体pcDNA-AHSP70,用酶切鉴定结果;应用该载体转染人喉表皮样癌细胞Hep-2,G418筛选阳性克隆;western blot和免疫组化检测转染前后瘤细胞的HSP70的表达.检测转染前后瘤细胞的生物学性状.结果获得pcDNA-AHSP70真核表达载体,HSP70反义RNA阻断了Hep-2细胞的HSP70的表达,经western blotting和免疫组化证实,实验组瘤细胞不能表达或低表达HSP70,而对照和空载体组高表达HSP70.转染反义HSP70的真核表达载体的Hep-2细胞比空载体组和对照组的细胞生长缓慢,细胞周期可见实验组出现亚二倍凋亡峰,而空载体组没有.结论本研究成功构建了反义HSP70真核表达载体并在人喉癌细胞得以表达.
目的進行促凋亡治療喉癌實驗,構建和鑒定攜帶反義HSP70(heat shock protein 70)基因的真覈錶達載體.方法將HSP70 cDNA反嚮剋隆入pcDNA 3.1,構建CMV啟動子控製的真覈錶達載體pcDNA-AHSP70,用酶切鑒定結果;應用該載體轉染人喉錶皮樣癌細胞Hep-2,G418篩選暘性剋隆;western blot和免疫組化檢測轉染前後瘤細胞的HSP70的錶達.檢測轉染前後瘤細胞的生物學性狀.結果穫得pcDNA-AHSP70真覈錶達載體,HSP70反義RNA阻斷瞭Hep-2細胞的HSP70的錶達,經western blotting和免疫組化證實,實驗組瘤細胞不能錶達或低錶達HSP70,而對照和空載體組高錶達HSP70.轉染反義HSP70的真覈錶達載體的Hep-2細胞比空載體組和對照組的細胞生長緩慢,細胞週期可見實驗組齣現亞二倍凋亡峰,而空載體組沒有.結論本研究成功構建瞭反義HSP70真覈錶達載體併在人喉癌細胞得以錶達.
목적진행촉조망치료후암실험,구건화감정휴대반의HSP70(heat shock protein 70)기인적진핵표체재체.방법장HSP70 cDNA반향극륭입pcDNA 3.1,구건CMV계동자공제적진핵표체재체pcDNA-AHSP70,용매절감정결과;응용해재체전염인후표피양암세포Hep-2,G418사선양성극륭;western blot화면역조화검측전염전후류세포적HSP70적표체.검측전염전후류세포적생물학성상.결과획득pcDNA-AHSP70진핵표체재체,HSP70반의RNA조단료Hep-2세포적HSP70적표체,경western blotting화면역조화증실,실험조류세포불능표체혹저표체HSP70,이대조화공재체조고표체HSP70.전염반의HSP70적진핵표체재체적Hep-2세포비공재체조화대조조적세포생장완만,세포주기가견실험조출현아이배조망봉,이공재체조몰유.결론본연구성공구건료반의HSP70진핵표체재체병재인후암세포득이표체.
