CAJ | 학술논문

利用PCR技术和SOE技术扩增牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6和mpb64-esat-6融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCA、pCE6、pCH、pCM、pCAE、pCHE和pCME.转染SP2/0细胞,检测目的基因的表达.以各重组质粒和pCDNA3.1(+)及PBS免疫BALB/c小鼠后检测血清特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况和IFN～γ分泌情况.结果表明,7种重组质粒免疫后小鼠血清抗体水平持续上升,与pCDNA3.1(+)对照组和PBS对照组相比差异显著(P＜0.05),其中pCA组血清抗体水平明显高于其他6种DNA疫苗免疫组(P＜0.05);三免两周后,融合基因免疫组的刺激值(SI值)与单基因免疫组相比差异显著(P＜0.05),其中以pCME组的SI值最高;PPD刺激后融合基因DNA疫苗免疫组小鼠脾细胞分泌的IFN～γ高于单基因DNA疫苗组(P＜0.05),而两对照组则未检测到IFN～γ的产生.成功构建了牛分枝杆菌ag85b、esat-6、hsp65、mpb64单基因和ag85b-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6双价融合基因DNA疫苗,从而为牛结核病新型疫苗的研制奠定了基础.
이용PCR기술화SOE기술확증우분지간균ag85b、esat-6、hsp65、mpb64기인화ag85b-esat-6、hsp65-esat-6화mpb64-esat-6융합기인,련접진핵표체재체pCDNA3.1(+),구건중조질립pCA、pCE6、pCH、pCM、pCAE、pCHE화pCME.전염SP2/0세포,검측목적기인적표체.이각중조질립화pCDNA3.1(+)급PBS면역BALB/c소서후검측혈청특이성항체수평、비림파세포증식정황화IFN～γ분비정황.결과표명,7충중조질립면역후소서혈청항체수평지속상승,여pCDNA3.1(+)대조조화PBS대조조상비차이현저(P＜0.05),기중pCA조혈청항체수평명현고우기타6충DNA역묘면역조(P＜0.05);삼면량주후,융합기인면역조적자격치(SI치)여단기인면역조상비차이현저(P＜0.05),기중이pCME조적SI치최고;PPD자격후융합기인DNA역묘면역조소서비세포분비적IFN～γ고우단기인DNA역묘조(P＜0.05),이량대조조칙미검측도IFN～γ적산생.성공구건료우분지간균ag85b、esat-6、hsp65、mpb64단기인화ag85b-esat-6、hsp65-esat-6、mpb64-esat-6쌍개융합기인DNA역묘,종이위우결핵병신형역묘적연제전정료기출.