中国生物化学与分子生物学报
中國生物化學與分子生物學報
중국생물화학여분자생물학보
CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY
2008年
5期
469-474
,共6页
张学尧%陈云霞%史鹏%梁爱华%袁静明
張學堯%陳雲霞%史鵬%樑愛華%袁靜明
장학요%진운하%사붕%량애화%원정명
D-海因酶%Co2+-海因酶%金属离子含量%酶活性鉴定
D-海因酶%Co2+-海因酶%金屬離子含量%酶活性鑒定
D-해인매%Co2+-해인매%금속리자함량%매활성감정
利用产D-海因酶(HDT)的重组pE-hdt/E.coli菌株,在LB培养基中添加40 μmol/L的 Co2+,37℃培养10 h,表达产物经Q-Sepharose阴离子交换剂和Phenyl-Sepharose疏水层析,获得电泳纯Co2+-D-海因酶(Co2+-HDT).该酶对底物DL-海因的比活性较HDT高约6倍,达21.8 U/mg.可见光光谱分析表明,在498 am和568 nm处呈现Co2+.海因酶络合物的特征性吸收峰.用ICP-AES测定纯酶金属离子含量,HDT每摩尔亚基含0.93摩尔Zn2+和0.04摩尔Co2+,而Co2+-HDT中每摩尔亚基中含0.17摩尔Zno2+和0.89摩尔Co2+-这一结果表明,HDT中的zno2+已被co2+所替代.此外,在动力学常数,pH和温度稳定性,金属螯合剂EDTA的影响等方面,HDT和Co2+.HDT也略有差异.
利用產D-海因酶(HDT)的重組pE-hdt/E.coli菌株,在LB培養基中添加40 μmol/L的 Co2+,37℃培養10 h,錶達產物經Q-Sepharose陰離子交換劑和Phenyl-Sepharose疏水層析,穫得電泳純Co2+-D-海因酶(Co2+-HDT).該酶對底物DL-海因的比活性較HDT高約6倍,達21.8 U/mg.可見光光譜分析錶明,在498 am和568 nm處呈現Co2+.海因酶絡閤物的特徵性吸收峰.用ICP-AES測定純酶金屬離子含量,HDT每摩爾亞基含0.93摩爾Zn2+和0.04摩爾Co2+,而Co2+-HDT中每摩爾亞基中含0.17摩爾Zno2+和0.89摩爾Co2+-這一結果錶明,HDT中的zno2+已被co2+所替代.此外,在動力學常數,pH和溫度穩定性,金屬螯閤劑EDTA的影響等方麵,HDT和Co2+.HDT也略有差異.
이용산D-해인매(HDT)적중조pE-hdt/E.coli균주,재LB배양기중첨가40 μmol/L적 Co2+,37℃배양10 h,표체산물경Q-Sepharose음리자교환제화Phenyl-Sepharose소수층석,획득전영순Co2+-D-해인매(Co2+-HDT).해매대저물DL-해인적비활성교HDT고약6배,체21.8 U/mg.가견광광보분석표명,재498 am화568 nm처정현Co2+.해인매락합물적특정성흡수봉.용ICP-AES측정순매금속리자함량,HDT매마이아기함0.93마이Zn2+화0.04마이Co2+,이Co2+-HDT중매마이아기중함0.17마이Zno2+화0.89마이Co2+-저일결과표명,HDT중적zno2+이피co2+소체대.차외,재동역학상수,pH화온도은정성,금속오합제EDTA적영향등방면,HDT화Co2+.HDT야략유차이.
