CAJ | 학술논문

背景:现有国内外文献报道的脂肪干细胞分离、培养方法并不完全一致,所应用的消化酶、消化方法、培养基等均存在差异.目的:观察体外分离培养的兔脂肪干细胞生物学特性.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2007-04/2008-03在昆明医学院生物医学中心干细胞所完成.材料:健康成年新西兰大白兔6只,由昆明医学院实验动物中心提供.Ⅰ型胶原酶为美国Gibco公司产品,胰蛋白酶为美国Sigma公司产品.方法:无菌切取兔腹股沟皮下脂肪垫,采用Ⅰ型胶原酶搅拌消化法分离培养原代脂肪干细胞,待细胞生长至80%融合时传代.主要观察指标:倒置显微镜和苏木精-伊红染色观察细胞形态及生长情况,免疫荧光细胞化学染色检测细胞表面抗原的表达,MTT比色法绘制细胞牛长曲线,流式细胞仪测定细胞增殖指数.结果:自兔皮下脂肪分离培养获得的脂肪干细胞增殖迅速,低密度生长时呈三角形或短梭形,核/浆比例较大,接近融合时呈成纤维细胞样外观,长期传代形态无明显改变.第3代脂肪干细胞表面抗原CD44呈阳性表达,CD34为阴性;细胞生长曲线呈"S"形,在对数生长期其细胞倍增时间为59 h.随传代次数的增加,来自同一供体的兔源性脂肪干细胞增殖指数逐渐升高,至第8代达到最高,以后逐渐降低.结论:兔皮下脂肪组织中含有丰富的间充质干细胞,兔源性脂肪十细胞体外以成纤维细胞样形态贴壁生长,表达CD44表面标志物,具有较强的体外增殖能力.
배경:현유국내외문헌보도적지방간세포분리、배양방법병불완전일치,소응용적소화매、소화방법、배양기등균존재차이.목적:관찰체외분리배양적토지방간세포생물학특성.설계、시간급지점:세포학체외관찰,우2007-04/2008-03재곤명의학원생물의학중심간세포소완성.재료:건강성년신서란대백토6지,유곤명의학원실험동물중심제공.Ⅰ형효원매위미국Gibco공사산품,이단백매위미국Sigma공사산품.방법:무균절취토복고구피하지방점,채용Ⅰ형효원매교반소화법분리배양원대지방간세포,대세포생장지80%융합시전대.주요관찰지표:도치현미경화소목정-이홍염색관찰세포형태급생장정황,면역형광세포화학염색검측세포표면항원적표체,MTT비색법회제세포우장곡선,류식세포의측정세포증식지수.결과:자토피하지방분리배양획득적지방간세포증식신속,저밀도생장시정삼각형혹단사형,핵/장비례교대,접근융합시정성섬유세포양외관,장기전대형태무명현개변.제3대지방간세포표면항원CD44정양성표체,CD34위음성;세포생장곡선정"S"형,재대수생장기기세포배증시간위59 h.수전대차수적증가,래자동일공체적토원성지방간세포증식지수축점승고,지제8대체도최고,이후축점강저.결론:토피하지방조직중함유봉부적간충질간세포,토원성지방십세포체외이성섬유세포양형태첩벽생장,표체CD44표면표지물,구유교강적체외증식능력.