丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立
병간병독전기인조cDNA극륭침염세포배양체계적건립
  • 万方数据
    科学通报 과학통보
    CHINESE SCIENCE BULLETIN
    2004年 10期 965-970 ,共6页

    姚相杰%郭佳%郑从义%方呈祥%屈三甫%陈震球%李中红%李信墙%李卫云

    요상걸%곽가%정종의%방정상%굴삼보%진진구%리중홍%리신장%리위운

    丙型肝炎病毒(HCV) 全基因组 侵染性cDNA克隆 重组痘病毒 细胞培养体系 丙型肝炎病毒(HCV) 全基因組 侵染性cDNA剋隆 重組痘病毒 細胞培養體繫
    병형간염병독(HCV) 전기인조 침염성cDNA극륭 중조두병독 세포배양체계
    以含有丙肝病毒全基因组cDNA的重组质粒(pHCV)为材料, 通过基因转染、重组痘病毒辅助使之在HeLa细胞中表达HCV病毒体, 建立了一种新的HCV体外细胞培养系统. 采用RT-PCR, 荧光定量RT-PCR, 链特异性RT-PCR, 免疫印迹, 免疫电子显微镜和电子显微镜负染技术跟踪检测HCV的增殖效率, 结果显示, 该培养体系中有HCV正链RNA的合成和HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达, 并组装成直径约47 nm的HCV病毒体, 病毒体可被偶联有胶体金的抗HCV结构蛋白E2的单抗标记; 该体系产生的HCV病毒体滴度达107基因拷贝/mL, 远远高于病人血清中的HCV基因拷贝数, 也高于迄今报道的任何一种HCV细胞培养体系的病毒滴度. 检测结果证明, 转染细胞裂解上清中的HCV病毒体可以感染肝癌细胞系Huh7, 并在感染细胞中增殖和合成负链RNA中间体, 病毒滴度达106基因拷贝/mL.
    이함유병간병독전기인조cDNA적중조질립(pHCV)위재료, 통과기인전염、중조두병독보조사지재HeLa세포중표체HCV병독체, 건립료일충신적HCV체외세포배양계통. 채용RT-PCR, 형광정량RT-PCR, 련특이성RT-PCR, 면역인적, 면역전자현미경화전자현미경부염기술근종검측HCV적증식효솔, 결과현시, 해배양체계중유HCV정련RNA적합성화HCV결구단백、비결구단백적표체, 병조장성직경약47 nm적HCV병독체, 병독체가피우련유효체금적항HCV결구단백E2적단항표기; 해체계산생적HCV병독체적도체107기인고패/mL, 원원고우병인혈청중적HCV기인고패수, 야고우흘금보도적임하일충HCV세포배양체계적병독적도. 검측결과증명, 전염세포렬해상청중적HCV병독체가이감염간암세포계Huh7, 병재감염세포중증식화합성부련RNA중간체, 병독적도체106기인고패/mL.
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