CAJ | 학술논문

为获得新的鉴别诊断结核杆菌感染的候选抗原,根据Gene Bank中登录的结核杆菌H37 Rv的TB 9.7基因序列设计1对引物,以结核杆菌H37 Rv基因组DNA为模板,PCR扩增得到TB 9.7基因DNA片段.将该扩增片段克隆于PMD18-T载体中,得到载体PMD18-T-TB9.7.分别将pET32a质粒和PMD18-T-TB 9.7质粒用限制性内切酶EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,并将纯化的TB 9.7基因亚克隆至pET32a中,获得重组表达质粒pET32a-TB 9.7.将其转化E.coliBL21 IPTG诱导后,经SDS-PAGE、Western blot分析鉴定,可见约30ku的外源蛋白带.表明TB9.7基因在大肠杆菌中得到了表达.用Ni-NTA Agarose试剂盒进行蛋白纯化,获得纯化的TB9.7融合蛋白,建立间接ELISA诊断方法,检测了30份结核病人的痰检阳性血清,120份健康人的血清,敏感性为56.6％,特异性为97％,与痰检结果的符合率为84％.
위획득신적감별진단결핵간균감염적후선항원,근거Gene Bank중등록적결핵간균H37 Rv적TB 9.7기인서렬설계1대인물,이결핵간균H37 Rv기인조DNA위모판,PCR확증득도TB 9.7기인DNA편단.장해확증편단극륭우PMD18-T재체중,득도재체PMD18-T-TB9.7.분별장pET32a질립화PMD18-T-TB 9.7질립용한제성내절매EcoRⅠ화XhoⅠ쌍매절,병장순화적TB 9.7기인아극륭지pET32a중,획득중조표체질립pET32a-TB 9.7.장기전화E.coliBL21 IPTG유도후,경SDS-PAGE、Western blot분석감정,가견약30ku적외원단백대.표명TB9.7기인재대장간균중득도료표체.용Ni-NTA Agarose시제합진행단백순화,획득순화적TB9.7융합단백,건립간접ELISA진단방법,검측료30빈결핵병인적담검양성혈청,120빈건강인적혈청,민감성위56.6％,특이성위97％,여담검결과적부합솔위84％.