CAJ | 학술논문

背景:有文献报道骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)异源二聚体比同源二聚体的活性高,目前国内外尚无BMP-4/7异源二聚体与BMP-4同源二聚体间诱导成骨活性比较的报道.目的:观察不同基因BMP-4、BMP-4/7对骨髓基质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨活性的差异,探讨融合基因BMP-4/7的生物学活性.方法:经脂质体转染分离培养的兔BMSCs,G418筛选出稳定表达株,利用RT-PCR法证明目的基因在BMSCs中的表达情况;以BMP-4和BMP4/7融合基因修饰的AAV载体,转染兔BMSCs,MTT法检测不同基因转染细胞的增殖能力;以BMP-4单基因和BMP-4/7融合基因修饰的AAV载体转染兔BMSCs 7 d后,测定两组细胞内碱性磷酸酶及骨钙素水平,观察成骨活性的变化.结果与结论:实验成功构建高滴度的分别携带BMP-4单基因、BMP-4/7融合基因的重组腺相关病毒载体AAV-BMP-4、AAV-BMP-4/7;RT-PCR结果证明目的基因能够在BMSCs中得到稳定表达.AAV-BMP-4及AAV-BMP-4/7载体转染效率分别为68.20%、72.18%;转染BMSCs后,细胞增殖能力均明显提高,BMP-4/7融合基因的细胞增殖能力活性高于BMP-4单基因.以BMP-4和BMP-4/7融合基因修饰的AAV转染细胞7 d后,细胞内碱性磷酸酶活性明显上调,骨钙素水平升高,成骨活性均增强;两种基因比较,BMP-4/7融合基因成骨活性强于BMP-4单基因(P < 0.01).提示BMP-4、BMP-4/7修饰的AAV载体转染效率高,对BMSCs均有成骨活性,其中BMP-4/7融合基因成骨活性强于BMP-4单基因.
배경:유문헌보도골형태발생단백(bone morphogenetic proteins,BMPs)이원이취체비동원이취체적활성고,목전국내외상무BMP-4/7이원이취체여BMP-4동원이취체간유도성골활성비교적보도.목적:관찰불동기인BMP-4、BMP-4/7대골수기질간세포(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)성골활성적차이,탐토융합기인BMP-4/7적생물학활성.방법:경지질체전염분리배양적토BMSCs,G418사선출은정표체주,이용RT-PCR법증명목적기인재BMSCs중적표체정황;이BMP-4화BMP4/7융합기인수식적AAV재체,전염토BMSCs,MTT법검측불동기인전염세포적증식능력;이BMP-4단기인화BMP-4/7융합기인수식적AAV재체전염토BMSCs 7 d후,측정량조세포내감성린산매급골개소수평,관찰성골활성적변화.결과여결론:실험성공구건고적도적분별휴대BMP-4단기인、BMP-4/7융합기인적중조선상관병독재체AAV-BMP-4、AAV-BMP-4/7;RT-PCR결과증명목적기인능구재BMSCs중득도은정표체.AAV-BMP-4급AAV-BMP-4/7재체전염효솔분별위68.20%、72.18%;전염BMSCs후,세포증식능력균명현제고,BMP-4/7융합기인적세포증식능력활성고우BMP-4단기인.이BMP-4화BMP-4/7융합기인수식적AAV전염세포7 d후,세포내감성린산매활성명현상조,골개소수평승고,성골활성균증강;량충기인비교,BMP-4/7융합기인성골활성강우BMP-4단기인(P < 0.01).제시BMP-4、BMP-4/7수식적AAV재체전염효솔고,대BMSCs균유성골활성,기중BMP-4/7융합기인성골활성강우BMP-4단기인.