CAJ | 학술논문

目的:观察慢病毒载体(Lentivirus vectors,LVs)介导的增强型绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescence protein,eGFP)基因转染离体兔角膜上皮细胞对其生理功能的影响.方法:角膜上皮细胞的原代及传代培养并细胞鉴定.分正常细胞组(对照组)与转染细胞组.LVs介导的eGFP基因(Lenti-eGFP)以最适感染复数(Multiples of infection,MOI)=100转染角膜上皮细胞并成功传代,倒置荧光显微镜观察eGFP的表达情况.HE染色光镜观察及透射电子显微镜观察2组细胞的形态及超微结构变化;计算2组细胞在传代第2、3、4天的细胞增殖率;流式细胞技术(Flow cytometer,FCM)检测2组角膜上皮细胞凋亡率的变化.结果:eGFP于转染48 h即开始有表达,随着转染时间的延长其在角膜上皮细胞内的表达增强.细胞成功传代后,eGFP仍明显表达于角膜上皮细胞.在最适感染复数,即MOI=100时,HE染色光镜观察见转染组细胞形态规则,无异常核分裂像,与对照组角膜上皮细胞形态一致;透射电子显微镜观察转染组细胞超微结构与对照组细胞无明显差别.2组细胞分别在传代第2、3、4天的增殖率差异无统计学意义(P>0.05).FCM检测细胞凋亡率2组间无明显差异(P>0.05).结论:Lenti-eGFP可以有效转染离体兔角膜上皮细胞,但对上皮的影响需要进一步探讨.
목적:관찰만병독재체(Lentivirus vectors,LVs)개도적증강형록색형광단백(Enhanced green fluorescence protein,eGFP)기인전염리체토각막상피세포대기생리공능적영향.방법:각막상피세포적원대급전대배양병세포감정.분정상세포조(대조조)여전염세포조.LVs개도적eGFP기인(Lenti-eGFP)이최괄감염복수(Multiples of infection,MOI)=100전염각막상피세포병성공전대,도치형광현미경관찰eGFP적표체정황.HE염색광경관찰급투사전자현미경관찰2조세포적형태급초미결구변화;계산2조세포재전대제2、3、4천적세포증식솔;류식세포기술(Flow cytometer,FCM)검측2조각막상피세포조망솔적변화.결과:eGFP우전염48 h즉개시유표체,수착전염시간적연장기재각막상피세포내적표체증강.세포성공전대후,eGFP잉명현표체우각막상피세포.재최괄감염복수,즉MOI=100시,HE염색광경관찰견전염조세포형태규칙,무이상핵분렬상,여대조조각막상피세포형태일치;투사전자현미경관찰전염조세포초미결구여대조조세포무명현차별.2조세포분별재전대제2、3、4천적증식솔차이무통계학의의(P>0.05).FCM검측세포조망솔2조간무명현차이(P>0.05).결론:Lenti-eGFP가이유효전염리체토각막상피세포,단대상피적영향수요진일보탐토.