中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2005年
8期
944-946
,共3页
甲胎蛋白%逆转录病毒载体%肝细胞
甲胎蛋白%逆轉錄病毒載體%肝細胞
갑태단백%역전록병독재체%간세포
目的建立对肝癌细胞具有靶向调控的高感染性和高分泌性产病毒细胞系.方法将重组反义甲胎蛋白增强子/单纯疱疹病毒胸苷激酶基因逆转录病毒载体(pL/TK/AFE/SN)转染至PA317包装细胞,经G418(400 mg/L)筛选、病毒滴度测定.以病毒上清感染培养的Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞,并抽提细胞基因组DNA作Southern blot分析;观察GCV(100 mg/L)对细胞生长的影响.结果转染pL/TK/AFE/SN的PA317细胞经G418筛选2周获阳性克隆;病毒滴度为5.4×104～3.8×105 CFU/ml.Southern杂交证实前病毒已完整整合于PA317细胞,并稳定整合于Hep3B肝癌细胞和Hela宫颈癌细胞中.导入AFE/TK基因的Hep3B肝癌细胞经GCV作用后的存活率在2、4、6 d时分别降低35%、87%、95%,生长明显受抑制(F=7.23,P<0.01).结论携带AFE/TK基因的产病毒细胞系能够成功地将AFE/TK基因转移到感染细胞中.
目的建立對肝癌細胞具有靶嚮調控的高感染性和高分泌性產病毒細胞繫.方法將重組反義甲胎蛋白增彊子/單純皰疹病毒胸苷激酶基因逆轉錄病毒載體(pL/TK/AFE/SN)轉染至PA317包裝細胞,經G418(400 mg/L)篩選、病毒滴度測定.以病毒上清感染培養的Hep3B肝癌細胞和Hela宮頸癌細胞,併抽提細胞基因組DNA作Southern blot分析;觀察GCV(100 mg/L)對細胞生長的影響.結果轉染pL/TK/AFE/SN的PA317細胞經G418篩選2週穫暘性剋隆;病毒滴度為5.4×104～3.8×105 CFU/ml.Southern雜交證實前病毒已完整整閤于PA317細胞,併穩定整閤于Hep3B肝癌細胞和Hela宮頸癌細胞中.導入AFE/TK基因的Hep3B肝癌細胞經GCV作用後的存活率在2、4、6 d時分彆降低35%、87%、95%,生長明顯受抑製(F=7.23,P<0.01).結論攜帶AFE/TK基因的產病毒細胞繫能夠成功地將AFE/TK基因轉移到感染細胞中.
목적건립대간암세포구유파향조공적고감염성화고분비성산병독세포계.방법장중조반의갑태단백증강자/단순포진병독흉감격매기인역전록병독재체(pL/TK/AFE/SN)전염지PA317포장세포,경G418(400 mg/L)사선、병독적도측정.이병독상청감염배양적Hep3B간암세포화Hela궁경암세포,병추제세포기인조DNA작Southern blot분석;관찰GCV(100 mg/L)대세포생장적영향.결과전염pL/TK/AFE/SN적PA317세포경G418사선2주획양성극륭;병독적도위5.4×104～3.8×105 CFU/ml.Southern잡교증실전병독이완정정합우PA317세포,병은정정합우Hep3B간암세포화Hela궁경암세포중.도입AFE/TK기인적Hep3B간암세포경GCV작용후적존활솔재2、4、6 d시분별강저35%、87%、95%,생장명현수억제(F=7.23,P<0.01).결론휴대AFE/TK기인적산병독세포계능구성공지장AFE/TK기인전이도감염세포중.
