生物工程学报
生物工程學報
생물공정학보
CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY
2006年
3期
373-377
,共5页
杨洋%陈岚%韩兵社%许彩民%潘华珍
楊洋%陳嵐%韓兵社%許綵民%潘華珍
양양%진람%한병사%허채민%반화진
朊蛋白%N-糖基化修饰%糖蛋白
朊蛋白%N-糖基化脩飾%糖蛋白
원단백%N-당기화수식%당단백
构建并表达人朊蛋白N-糖基化修饰位点突变的真核表达载体,有助于进一步研究朊蛋白N-糖基化修饰的生物学功能.定点突变野生型人朊蛋白基因PRNP,将获得的突变体亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1中,并在人宫颈癌细胞株HeLa中瞬时表达各种朊蛋白糖基化修饰位点突变体,利用免疫印迹和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鉴定表达产物的糖基化形式.经Western blot鉴定,野生型和突变型朊蛋白表达产物出现不同形式的泳动特征,分别出现特异性糖基化修饰的多个条带,单糖基化修饰的两条条带和无糖基化修饰的一条条带.经PNGase F糖苷酶消化,野生型和糖基化单点突变型表达产物均能被糖苷酶消化,其分子量下移,去糖基化突变型表达产物的分子条带位置不变.通过突变野生型人朊蛋白基因PRNP的N-糖基化修饰位点,获得单糖基化修饰和去N-糖基化修饰的6种人朊蛋白突变体,并能够在HeLa细胞株中瞬时表达单糖基化修饰和去N-糖基化修饰朊蛋白,为进一步研究朊蛋白的相关功能建立良好基础.
構建併錶達人朊蛋白N-糖基化脩飾位點突變的真覈錶達載體,有助于進一步研究朊蛋白N-糖基化脩飾的生物學功能.定點突變野生型人朊蛋白基因PRNP,將穫得的突變體亞剋隆至真覈錶達載體pcDNA3.1中,併在人宮頸癌細胞株HeLa中瞬時錶達各種朊蛋白糖基化脩飾位點突變體,利用免疫印跡和糖苷酶消化等糖蛋白分析方法鑒定錶達產物的糖基化形式.經Western blot鑒定,野生型和突變型朊蛋白錶達產物齣現不同形式的泳動特徵,分彆齣現特異性糖基化脩飾的多箇條帶,單糖基化脩飾的兩條條帶和無糖基化脩飾的一條條帶.經PNGase F糖苷酶消化,野生型和糖基化單點突變型錶達產物均能被糖苷酶消化,其分子量下移,去糖基化突變型錶達產物的分子條帶位置不變.通過突變野生型人朊蛋白基因PRNP的N-糖基化脩飾位點,穫得單糖基化脩飾和去N-糖基化脩飾的6種人朊蛋白突變體,併能夠在HeLa細胞株中瞬時錶達單糖基化脩飾和去N-糖基化脩飾朊蛋白,為進一步研究朊蛋白的相關功能建立良好基礎.
구건병표체인원단백N-당기화수식위점돌변적진핵표체재체,유조우진일보연구원단백N-당기화수식적생물학공능.정점돌변야생형인원단백기인PRNP,장획득적돌변체아극륭지진핵표체재체pcDNA3.1중,병재인궁경암세포주HeLa중순시표체각충원단백당기화수식위점돌변체,이용면역인적화당감매소화등당단백분석방법감정표체산물적당기화형식.경Western blot감정,야생형화돌변형원단백표체산물출현불동형식적영동특정,분별출현특이성당기화수식적다개조대,단당기화수식적량조조대화무당기화수식적일조조대.경PNGase F당감매소화,야생형화당기화단점돌변형표체산물균능피당감매소화,기분자량하이,거당기화돌변형표체산물적분자조대위치불변.통과돌변야생형인원단백기인PRNP적N-당기화수식위점,획득단당기화수식화거N-당기화수식적6충인원단백돌변체,병능구재HeLa세포주중순시표체단당기화수식화거N-당기화수식원단백,위진일보연구원단백적상관공능건립량호기출.
