CAJ | 학술논문

目的:构建并制备血管生成素-1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体.方法:采用基因克隆技术克隆目的基因ANG-1,并将得到的基因亚克隆至含有报告基因EGFP的穿梭载体pAdTrack-CMV;使用Padeasy-1腺病毒系统将含有目的基因的穿梭载体与腺病毒骨架质粒在细菌BJ5183中同源重组,产生重组腺病毒载体;线性化重组的腺病毒转染入QBI-293A细胞中对重组的腺病毒进行包装并扩增. 结果:ANG-1基因与腺病毒穿梭载体连接成功,经Xho I/EcoR V双酶切后琼脂糖电泳可见在1.5 kb处出现特异性条带,证明pAdTrack-CMV-ANG-1重组质粒构建成功;重组的穿梭载体与pAdeasy-1质粒重组后,产物经Pac I酶切后琼脂糖电泳可见一大一小两个片段. 大小约为30 kb和4.5 kb,与预期结果相符,证明重组腺病毒pAd-ANG-1-EGFP构建成功;线性化重组的腺病毒转染入QBI-293A细胞后包装成功. 扩增后病毒滴度为2×1014 v.g./L,EGFP活性检测腺病毒感染细胞阳性率在30%以上. 结论:成功制备了pAd-ANG-1-EGFP腺病毒. 为骨组织工程血管化的研究打下基础.
목적:구건병제비혈관생성소-1화EGFP쌍기인공표체중조선병독재체.방법:채용기인극륭기술극륭목적기인ANG-1,병장득도적기인아극륭지함유보고기인EGFP적천사재체pAdTrack-CMV;사용Padeasy-1선병독계통장함유목적기인적천사재체여선병독골가질립재세균BJ5183중동원중조,산생중조선병독재체;선성화중조적선병독전염입QBI-293A세포중대중조적선병독진행포장병확증. 결과:ANG-1기인여선병독천사재체련접성공,경Xho I/EcoR V쌍매절후경지당전영가견재1.5 kb처출현특이성조대,증명pAdTrack-CMV-ANG-1중조질립구건성공;중조적천사재체여pAdeasy-1질립중조후,산물경Pac I매절후경지당전영가견일대일소량개편단. 대소약위30 kb화4.5 kb,여예기결과상부,증명중조선병독pAd-ANG-1-EGFP구건성공;선성화중조적선병독전염입QBI-293A세포후포장성공. 확증후병독적도위2×1014 v.g./L,EGFP활성검측선병독감염세포양성솔재30%이상. 결론:성공제비료pAd-ANG-1-EGFP선병독. 위골조직공정혈관화적연구타하기출.