华北农学报
華北農學報
화북농학보
ACTA AGRICULTURAE BOREALI-SINICA
2011年
3期
16-20
,共5页
臧大康%郑桂玲%周洪旭%张媛%李国勋%李长友
臧大康%鄭桂玲%週洪旭%張媛%李國勛%李長友
장대강%정계령%주홍욱%장원%리국훈%리장우
Bt%cry8Fa2基因%基因克隆%蛋白表达
Bt%cry8Fa2基因%基因剋隆%蛋白錶達
Bt%cry8Fa2기인%기인극륭%단백표체
以本实验室分离的Bt菌株B-DLL质粒DNA为模板,利用cry8类基因特异性引物JJX5和JJX3扩增出3.5kb的片段,将该片段插入克隆载体pMD 18-T中,筛选获得一个含新基因的克隆pMD-cry8new.序列测定表明,该基因编码区为3 525 bp,编码的蛋白质由1 174个氨基酸残基组成,理论分子量为133.05 kDa,等电点为pH4.69,为弱酸性蛋白.该基因核苷酸序列已在GenBank登录(Accession number:HQ174208),编码的氨基酸序列与Cry8Fa1的同源性最高达99.8%,被国际Btδ-内毒素命名委员会正式命名为Cry8Fa2.将cry8Fa2基因插入Bt表达载体pSXY422b中,电击导入Bt无晶体突变株HD-73-中,获得重组Bt工程菌HD73-Cry8Fa2,该工程菌能形成伴孢晶体,并表达130 kDa 的蛋白.生物测定结果表明,该基因表达产物对暗黑鳃金龟和华北大黑鳃金龟幼虫均不具有杀虫活性.
以本實驗室分離的Bt菌株B-DLL質粒DNA為模闆,利用cry8類基因特異性引物JJX5和JJX3擴增齣3.5kb的片段,將該片段插入剋隆載體pMD 18-T中,篩選穫得一箇含新基因的剋隆pMD-cry8new.序列測定錶明,該基因編碼區為3 525 bp,編碼的蛋白質由1 174箇氨基痠殘基組成,理論分子量為133.05 kDa,等電點為pH4.69,為弱痠性蛋白.該基因覈苷痠序列已在GenBank登錄(Accession number:HQ174208),編碼的氨基痠序列與Cry8Fa1的同源性最高達99.8%,被國際Btδ-內毒素命名委員會正式命名為Cry8Fa2.將cry8Fa2基因插入Bt錶達載體pSXY422b中,電擊導入Bt無晶體突變株HD-73-中,穫得重組Bt工程菌HD73-Cry8Fa2,該工程菌能形成伴孢晶體,併錶達130 kDa 的蛋白.生物測定結果錶明,該基因錶達產物對暗黑鰓金龜和華北大黑鰓金龜幼蟲均不具有殺蟲活性.
이본실험실분리적Bt균주B-DLL질립DNA위모판,이용cry8류기인특이성인물JJX5화JJX3확증출3.5kb적편단,장해편단삽입극륭재체pMD 18-T중,사선획득일개함신기인적극륭pMD-cry8new.서렬측정표명,해기인편마구위3 525 bp,편마적단백질유1 174개안기산잔기조성,이론분자량위133.05 kDa,등전점위pH4.69,위약산성단백.해기인핵감산서렬이재GenBank등록(Accession number:HQ174208),편마적안기산서렬여Cry8Fa1적동원성최고체99.8%,피국제Btδ-내독소명명위원회정식명명위Cry8Fa2.장cry8Fa2기인삽입Bt표체재체pSXY422b중,전격도입Bt무정체돌변주HD-73-중,획득중조Bt공정균HD73-Cry8Fa2,해공정균능형성반포정체,병표체130 kDa 적단백.생물측정결과표명,해기인표체산물대암흑새금구화화북대흑새금구유충균불구유살충활성.
