浙江大学学报（医学版）
浙江大學學報（醫學版）
절강대학학보（의학판）
JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY MEDICAL SCIENCES
2012年
4期
386-392
,共7页
张莹莹%黄亚东%葛仁山%朱丹雁
張瑩瑩%黃亞東%葛仁山%硃丹雁
장형형%황아동%갈인산%주단안
胚胎干细胞%类固醇生成因子1%睾丸/细胞学%间质细胞%SF-1%睾丸间质样细胞
胚胎榦細胞%類固醇生成因子1%睪汍/細胞學%間質細胞%SF-1%睪汍間質樣細胞
배태간세포%류고순생성인자1%고환/세포학%간질세포%SF-1%고환간질양세포
目的:建立小鼠胚胎干( embryonic stem,ES)细胞体外分化为睾丸间质样细胞(leydig -like cells)的模型.方法:采用脂质体转染方法将含类固醇生成因子1(steroidogenic factor 1,SF-1)基因片断的质粒转入小鼠ES-D3细胞,并在RA和8Br-cAMP作用下,体外诱导ES-D3细胞分化为睾丸间质样细胞,以空质粒转染组做阴性对照；通过光镜观察转染SF-1的ES-D3细胞定向分化为睾丸间质样细胞过程中的形态变化；用RT-PCR及Western Blot法检测分化过程中类固醇激素合成急性调节蛋白(StAR),胆固醇侧链裂解酶P450scc( CYP11A1)和3β-羟甾脱氢酶1(3β-HSD1)表达情况；免疫荧光法检测睾丸间质样细胞特异性蛋白P450scc及3β-HSD1表达.结果:ES-D3细胞转染SF-1质粒24h,即检测到SF-1基因表达.转染成功的ES-D3细胞在RA和8Br-cAMP诱导分化48 h后出现睾丸间质样细胞.分化而来的睾丸间质样细胞胞体大而圆润,长有触角,呈纺锤形；且表达睾丸间质样细胞特异性蛋白P450scc和3β-HSD1,同时StAR表达显著增加,而对照组细胞未表达睾丸间质样细胞特异性标志物StAR、P450scc和3β-HSD1.结论:通过对ES-D3细胞转染SF-1质粒并予以RA和8Br-cAMP诱导,成功建立ES-D3细胞定向分化为睾丸间质样细胞模型.
目的:建立小鼠胚胎榦( embryonic stem,ES)細胞體外分化為睪汍間質樣細胞(leydig -like cells)的模型.方法:採用脂質體轉染方法將含類固醇生成因子1(steroidogenic factor 1,SF-1)基因片斷的質粒轉入小鼠ES-D3細胞,併在RA和8Br-cAMP作用下,體外誘導ES-D3細胞分化為睪汍間質樣細胞,以空質粒轉染組做陰性對照；通過光鏡觀察轉染SF-1的ES-D3細胞定嚮分化為睪汍間質樣細胞過程中的形態變化；用RT-PCR及Western Blot法檢測分化過程中類固醇激素閤成急性調節蛋白(StAR),膽固醇側鏈裂解酶P450scc( CYP11A1)和3β-羥甾脫氫酶1(3β-HSD1)錶達情況；免疫熒光法檢測睪汍間質樣細胞特異性蛋白P450scc及3β-HSD1錶達.結果:ES-D3細胞轉染SF-1質粒24h,即檢測到SF-1基因錶達.轉染成功的ES-D3細胞在RA和8Br-cAMP誘導分化48 h後齣現睪汍間質樣細胞.分化而來的睪汍間質樣細胞胞體大而圓潤,長有觸角,呈紡錘形；且錶達睪汍間質樣細胞特異性蛋白P450scc和3β-HSD1,同時StAR錶達顯著增加,而對照組細胞未錶達睪汍間質樣細胞特異性標誌物StAR、P450scc和3β-HSD1.結論:通過對ES-D3細胞轉染SF-1質粒併予以RA和8Br-cAMP誘導,成功建立ES-D3細胞定嚮分化為睪汍間質樣細胞模型.
목적:건립소서배태간( embryonic stem,ES)세포체외분화위고환간질양세포(leydig -like cells)적모형.방법:채용지질체전염방법장함류고순생성인자1(steroidogenic factor 1,SF-1)기인편단적질립전입소서ES-D3세포,병재RA화8Br-cAMP작용하,체외유도ES-D3세포분화위고환간질양세포,이공질립전염조주음성대조；통과광경관찰전염SF-1적ES-D3세포정향분화위고환간질양세포과정중적형태변화；용RT-PCR급Western Blot법검측분화과정중류고순격소합성급성조절단백(StAR),담고순측련렬해매P450scc( CYP11A1)화3β-간치탈경매1(3β-HSD1)표체정황；면역형광법검측고환간질양세포특이성단백P450scc급3β-HSD1표체.결과:ES-D3세포전염SF-1질립24h,즉검측도SF-1기인표체.전염성공적ES-D3세포재RA화8Br-cAMP유도분화48 h후출현고환간질양세포.분화이래적고환간질양세포포체대이원윤,장유촉각,정방추형；차표체고환간질양세포특이성단백P450scc화3β-HSD1,동시StAR표체현저증가,이대조조세포미표체고환간질양세포특이성표지물StAR、P450scc화3β-HSD1.결론:통과대ES-D3세포전염SF-1질립병여이RA화8Br-cAMP유도,성공건립ES-D3세포정향분화위고환간질양세포모형.
