中国地方病学杂志
中國地方病學雜誌
중국지방병학잡지
CHINESE JOURNAL OF ENDEMIOLOGY
2006年
4期
453-456
,共4页
张唯哲%李妍%周海舟%服部俊夫%凌虹
張唯哲%李妍%週海舟%服部俊伕%凌虹
장유철%리연%주해주%복부준부%릉홍
HIV-1%HIV包膜蛋白质gp120%修饰%重叠延伸剪接法
HIV-1%HIV包膜蛋白質gp120%脩飾%重疊延伸剪接法
HIV-1%HIV포막단백질gp120%수식%중첩연신전접법
目的构建V3环完全或部分缺失的Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白表达体系.方法分别设计包膜糖蛋白两端及V3环删除区域两端的引物,采用重叠延伸剪接法进行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体的构建.得到的PCR产物经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切,将酶切产物与pSM载体连接,转化大肠埃希菌后筛选阳性克隆,经PCR及基因序列测定进行鉴定.结果获得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3环修饰体PCR产物,构建了其表达载体pSM-ADA△V3和pSM-ADAmV3,经转化和筛选获得了重组质粒,经PCR及基因测序鉴定显示重组质粒序列正确,为预期目的片段.结论成功构建了V3环修饰的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的表达载体.此结果为进一步构建伪病毒,观察V3环完全或部分缺失对病毒侵入靶细胞过程的影响,为开发阻止HIV-1进入靶细胞的药物或疫苗打下基础.
目的構建V3環完全或部分缺失的Ⅰ型人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)ADA株包膜糖蛋白錶達體繫.方法分彆設計包膜糖蛋白兩耑及V3環刪除區域兩耑的引物,採用重疊延伸剪接法進行HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3環脩飾體的構建.得到的PCR產物經EcoRⅠ和XhoⅠ雙酶切,將酶切產物與pSM載體連接,轉化大腸埃希菌後篩選暘性剋隆,經PCR及基因序列測定進行鑒定.結果穫得HIV-1 ADA株包膜糖蛋白V3環脩飾體PCR產物,構建瞭其錶達載體pSM-ADA△V3和pSM-ADAmV3,經轉化和篩選穫得瞭重組質粒,經PCR及基因測序鑒定顯示重組質粒序列正確,為預期目的片段.結論成功構建瞭V3環脩飾的HIV-1 ADA株包膜糖蛋白的錶達載體.此結果為進一步構建偽病毒,觀察V3環完全或部分缺失對病毒侵入靶細胞過程的影響,為開髮阻止HIV-1進入靶細胞的藥物或疫苗打下基礎.
목적구건V3배완전혹부분결실적Ⅰ형인류면역결함병독(human immunodeficiency virus type Ⅰ,HIV-1)ADA주포막당단백표체체계.방법분별설계포막당단백량단급V3배산제구역량단적인물,채용중첩연신전접법진행HIV-1 ADA주포막당단백V3배수식체적구건.득도적PCR산물경EcoRⅠ화XhoⅠ쌍매절,장매절산물여pSM재체련접,전화대장애희균후사선양성극륭,경PCR급기인서렬측정진행감정.결과획득HIV-1 ADA주포막당단백V3배수식체PCR산물,구건료기표체재체pSM-ADA△V3화pSM-ADAmV3,경전화화사선획득료중조질립,경PCR급기인측서감정현시중조질립서렬정학,위예기목적편단.결론성공구건료V3배수식적HIV-1 ADA주포막당단백적표체재체.차결과위진일보구건위병독,관찰V3배완전혹부분결실대병독침입파세포과정적영향,위개발조지HIV-1진입파세포적약물혹역묘타하기출.
