中国神经科学杂志
中國神經科學雜誌
중국신경과학잡지
CHINESE JOURNAL OF NEUROSCIENCE
2004年
4期
281-285
,共5页
马振莲%李欣%赵忠良%刘少君
馬振蓮%李訢%趙忠良%劉少君
마진련%리흔%조충량%류소군
脊髓损伤%差异表达基因%文库%消减杂交
脊髓損傷%差異錶達基因%文庫%消減雜交
척수손상%차이표체기인%문고%소감잡교
目的运用改良消减杂交技术构建大鼠脊髓损伤修复过程中出现的差异表达基因文库,为寻找在脊髓损伤后的修复过程中起关键作用的分子提供帮助.方法在经典消减杂交的基础上引进SMART反转录、长距离PCR、磁性分离系统、离心柱色谱等方法建立改良消减杂交技术,通过两轮消减杂交构建差异表达基因的cDNA消减文库,并对文库中的差异基因进行批量克隆与生物信息学分析.结果将两轮消减杂交后的差异表达基因转化大肠杆菌JM109以建立差异表达基因文库,库容量大小为2×103.从文库中随机挑取90个克隆进行酶切鉴定与测序分析,得到40个差异基因序列,其中32个已知序列,8个新序列.结论通过改良消减杂交成功建立了脊髓损伤修复过程中出现的差异表达基因文库,为筛选在大鼠脊髓损伤修复过程中起关键作用的基因,进一步探讨脊髓损伤修复的分子机制奠定了基础.
目的運用改良消減雜交技術構建大鼠脊髓損傷脩複過程中齣現的差異錶達基因文庫,為尋找在脊髓損傷後的脩複過程中起關鍵作用的分子提供幫助.方法在經典消減雜交的基礎上引進SMART反轉錄、長距離PCR、磁性分離繫統、離心柱色譜等方法建立改良消減雜交技術,通過兩輪消減雜交構建差異錶達基因的cDNA消減文庫,併對文庫中的差異基因進行批量剋隆與生物信息學分析.結果將兩輪消減雜交後的差異錶達基因轉化大腸桿菌JM109以建立差異錶達基因文庫,庫容量大小為2×103.從文庫中隨機挑取90箇剋隆進行酶切鑒定與測序分析,得到40箇差異基因序列,其中32箇已知序列,8箇新序列.結論通過改良消減雜交成功建立瞭脊髓損傷脩複過程中齣現的差異錶達基因文庫,為篩選在大鼠脊髓損傷脩複過程中起關鍵作用的基因,進一步探討脊髓損傷脩複的分子機製奠定瞭基礎.
목적운용개량소감잡교기술구건대서척수손상수복과정중출현적차이표체기인문고,위심조재척수손상후적수복과정중기관건작용적분자제공방조.방법재경전소감잡교적기출상인진SMART반전록、장거리PCR、자성분리계통、리심주색보등방법건립개량소감잡교기술,통과량륜소감잡교구건차이표체기인적cDNA소감문고,병대문고중적차이기인진행비량극륭여생물신식학분석.결과장량륜소감잡교후적차이표체기인전화대장간균JM109이건립차이표체기인문고,고용량대소위2×103.종문고중수궤도취90개극륭진행매절감정여측서분석,득도40개차이기인서렬,기중32개이지서렬,8개신서렬.결론통과개량소감잡교성공건립료척수손상수복과정중출현적차이표체기인문고,위사선재대서척수손상수복과정중기관건작용적기인,진일보탐토척수손상수복적분자궤제전정료기출.
