中国人兽共患病杂志
中國人獸共患病雜誌
중국인수공환병잡지
CHINESE JOURNAL OF ZOONOSES
2004年
11期
938-942
,共5页
贾广乐%刘茂军%张映%邵国青%聂向庭
賈廣樂%劉茂軍%張映%邵國青%聶嚮庭
가엄악%류무군%장영%소국청%섭향정
猪肺炎支原体%黏附因子基因%重组质粒%高效表达%免疫反应性
豬肺炎支原體%黏附因子基因%重組質粒%高效錶達%免疫反應性
저폐염지원체%점부인자기인%중조질립%고효표체%면역반응성
目的表达猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)168 株黏附因子(P97),探索其作为诊断抗原的可能性.方法采用PCR方法,从猪肺炎支原体168 株基因组DNA中扩增到黏附因子(P97)基因的抗原决定簇序列(R1区),产物经双酶切后克隆到表达载体pET-32a(+)中,具有正确阅读框架的重组表达质粒pET-32a(+)-P97(R1)转化感受态大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用SDS-PAGE和Western-blotting检测重组质粒目的基因表达.结果 (1)获得Mhp168株黏附因子基因R1区长约270bp的DNA片段,测序证明重组质粒pET-32a(+)-P97(R1)的外源基因序列与已报告的Mhp232及J株黏附因子基因序列基本一致;(2)SDS-PAGE检测表达产物,在相对分子量26.5kDa处有阳性表达条带,融合蛋白约占细菌蛋白总量的23.3%,主要以可溶性蛋白形式存在;(3)免疫印迹显示,该蛋白条带与兔抗猪肺炎支原体高免血清有阳性反应.结论 Mhp168株黏附因子基因在大肠杆菌中获得了高效表达,重组蛋白具有免疫反应性.
目的錶達豬肺炎支原體(Mycoplasma hyopneumoniae)168 株黏附因子(P97),探索其作為診斷抗原的可能性.方法採用PCR方法,從豬肺炎支原體168 株基因組DNA中擴增到黏附因子(P97)基因的抗原決定簇序列(R1區),產物經雙酶切後剋隆到錶達載體pET-32a(+)中,具有正確閱讀框架的重組錶達質粒pET-32a(+)-P97(R1)轉化感受態大腸桿菌BL21(DE3),經IPTG誘導錶達後採用SDS-PAGE和Western-blotting檢測重組質粒目的基因錶達.結果 (1)穫得Mhp168株黏附因子基因R1區長約270bp的DNA片段,測序證明重組質粒pET-32a(+)-P97(R1)的外源基因序列與已報告的Mhp232及J株黏附因子基因序列基本一緻;(2)SDS-PAGE檢測錶達產物,在相對分子量26.5kDa處有暘性錶達條帶,融閤蛋白約佔細菌蛋白總量的23.3%,主要以可溶性蛋白形式存在;(3)免疫印跡顯示,該蛋白條帶與兔抗豬肺炎支原體高免血清有暘性反應.結論 Mhp168株黏附因子基因在大腸桿菌中穫得瞭高效錶達,重組蛋白具有免疫反應性.
목적표체저폐염지원체(Mycoplasma hyopneumoniae)168 주점부인자(P97),탐색기작위진단항원적가능성.방법채용PCR방법,종저폐염지원체168 주기인조DNA중확증도점부인자(P97)기인적항원결정족서렬(R1구),산물경쌍매절후극륭도표체재체pET-32a(+)중,구유정학열독광가적중조표체질립pET-32a(+)-P97(R1)전화감수태대장간균BL21(DE3),경IPTG유도표체후채용SDS-PAGE화Western-blotting검측중조질립목적기인표체.결과 (1)획득Mhp168주점부인자기인R1구장약270bp적DNA편단,측서증명중조질립pET-32a(+)-P97(R1)적외원기인서렬여이보고적Mhp232급J주점부인자기인서렬기본일치;(2)SDS-PAGE검측표체산물,재상대분자량26.5kDa처유양성표체조대,융합단백약점세균단백총량적23.3%,주요이가용성단백형식존재;(3)면역인적현시,해단백조대여토항저폐염지원체고면혈청유양성반응.결론 Mhp168주점부인자기인재대장간균중획득료고효표체,중조단백구유면역반응성.
