畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2006年
6期
560-565
,共6页
杨炜峰%葛秀国%华进联%窦忠英
楊煒峰%葛秀國%華進聯%竇忠英
양위봉%갈수국%화진련%두충영
山羊%抗血清%补体%免疫外科%内细胞团%细胞毒性
山羊%抗血清%補體%免疫外科%內細胞糰%細胞毒性
산양%항혈청%보체%면역외과%내세포단%세포독성
分别用关中奶山羊脾脏细胞和胎儿成纤维细胞,免疫新西兰白兔各2只,共4只.通过3次静脉注射,每次注射4×108个细胞,间隔10 d,最后一次注射10 d后心脏采血制备抗血清,结果获得的4份抗血清均具有细胞毒性,由脾脏细胞免疫获得的抗血清溶解细胞的效价稍高.超排关中奶山羊24只和波尔山羊3只,6～9 d采胚共获得胚胎240枚,其中囊胚106枚,结果显示配种后7～9 d胚胎的发育阶段适宜于分离内细胞团(ICM).细胞毒性试验表明,抗血清对关中奶山羊红细胞、囊胚和波尔山羊囊胚均具有细胞毒性作用.通过比较抗血清50%溶解山羊红细胞效价与溶解囊胚滋养层细胞效价的差异,发现后者的适宜效价是抗血清50%溶解山羊红细胞效价的22～23倍,表明采用易于获得的山羊红细胞作预试验可以为免疫外科分离山羊ICM提供抗血清稀释比例参考.免疫外科法分离ICM采用两步法进行,获得最佳参数如下:抗血清稀释比例为1∶4～1∶15,补体稀释比例为1∶20,先在抗血清中作用30 min,再在补体中作用20～30 min,吹打除去溶解的滋养层细胞后即可获得ICM.分离得到的ICM形态特征与胚胎质量密切相关.山羊ICM接种于丝裂霉素处理过的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层后,2 d内贴壁.4～7 d后,ICM增殖为胚胎干细胞样集落,其周围出现大量空泡样细胞.
分彆用關中奶山羊脾髒細胞和胎兒成纖維細胞,免疫新西蘭白兔各2隻,共4隻.通過3次靜脈註射,每次註射4×108箇細胞,間隔10 d,最後一次註射10 d後心髒採血製備抗血清,結果穫得的4份抗血清均具有細胞毒性,由脾髒細胞免疫穫得的抗血清溶解細胞的效價稍高.超排關中奶山羊24隻和波爾山羊3隻,6～9 d採胚共穫得胚胎240枚,其中囊胚106枚,結果顯示配種後7～9 d胚胎的髮育階段適宜于分離內細胞糰(ICM).細胞毒性試驗錶明,抗血清對關中奶山羊紅細胞、囊胚和波爾山羊囊胚均具有細胞毒性作用.通過比較抗血清50%溶解山羊紅細胞效價與溶解囊胚滋養層細胞效價的差異,髮現後者的適宜效價是抗血清50%溶解山羊紅細胞效價的22～23倍,錶明採用易于穫得的山羊紅細胞作預試驗可以為免疫外科分離山羊ICM提供抗血清稀釋比例參攷.免疫外科法分離ICM採用兩步法進行,穫得最佳參數如下:抗血清稀釋比例為1∶4～1∶15,補體稀釋比例為1∶20,先在抗血清中作用30 min,再在補體中作用20～30 min,吹打除去溶解的滋養層細胞後即可穫得ICM.分離得到的ICM形態特徵與胚胎質量密切相關.山羊ICM接種于絲裂黴素處理過的小鼠胎兒成纖維細胞飼養層後,2 d內貼壁.4～7 d後,ICM增殖為胚胎榦細胞樣集落,其週圍齣現大量空泡樣細胞.
분별용관중내산양비장세포화태인성섬유세포,면역신서란백토각2지,공4지.통과3차정맥주사,매차주사4×108개세포,간격10 d,최후일차주사10 d후심장채혈제비항혈청,결과획득적4빈항혈청균구유세포독성,유비장세포면역획득적항혈청용해세포적효개초고.초배관중내산양24지화파이산양3지,6～9 d채배공획득배태240매,기중낭배106매,결과현시배충후7～9 d배태적발육계단괄의우분리내세포단(ICM).세포독성시험표명,항혈청대관중내산양홍세포、낭배화파이산양낭배균구유세포독성작용.통과비교항혈청50%용해산양홍세포효개여용해낭배자양층세포효개적차이,발현후자적괄의효개시항혈청50%용해산양홍세포효개적22～23배,표명채용역우획득적산양홍세포작예시험가이위면역외과분리산양ICM제공항혈청희석비례삼고.면역외과법분리ICM채용량보법진행,획득최가삼수여하:항혈청희석비례위1∶4～1∶15,보체희석비례위1∶20,선재항혈청중작용30 min,재재보체중작용20～30 min,취타제거용해적자양층세포후즉가획득ICM.분리득도적ICM형태특정여배태질량밀절상관.산양ICM접충우사렬매소처리과적소서태인성섬유세포사양층후,2 d내첩벽.4～7 d후,ICM증식위배태간세포양집락,기주위출현대량공포양세포.
