CAJ | 학술논문

从GenBank查询到的蚯蚓纤溶酶earthworm fibrinolytic enzyme,EFE)基因序列中,只有AY438624翻译的蛋白质序列与天然EfP-Ⅰ在N-端具有较高的相似性.根据该基因的5'与3'序列设计引物,通过RT-PCR从赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)获得一个完整的基因(GenBank,DQ418454).序列分析证明,由该基因编码蛋白质的N-末端与天然EfP-Ⅰ的N-末端的氨基酸顺序完全相同.SeanPmsite prediction programs分析显示,该基因与AY438624相似性极高,二者均属于胰蛋白酶家族;不同的是,该基因编码蛋白质的序列中含有N-糖苷键的结构域,所以DQ418454是Efp-Ⅰ中的一个新基因.在此基础上,构建了该基因的原核表达裁体pMAL-c2X-Efp-Ⅰ,并进行了转化、诱导和表达.Western blotting证明,表达产物同时具有MBP和Efp-Ⅰ的抗原特异性,是MBP和Efp-Ⅰ的融合蛋白(MBP-EfP-Ⅰ).经亲和层析分离纯化的MBP-EfP-Ⅰ,在酪蛋白平板和纤维蛋白平板上表现出明显的纤溶酶活性.
종GenBank사순도적구인섬용매earthworm fibrinolytic enzyme,EFE)기인서렬중,지유AY438624번역적단백질서렬여천연EfP-Ⅰ재N-단구유교고적상사성.근거해기인적5'여3'서렬설계인물,통과RT-PCR종적자애성인(Eisenia fetida)획득일개완정적기인(GenBank,DQ418454).서렬분석증명,유해기인편마단백질적N-말단여천연EfP-Ⅰ적N-말단적안기산순서완전상동.SeanPmsite prediction programs분석현시,해기인여AY438624상사성겁고,이자균속우이단백매가족;불동적시,해기인편마단백질적서렬중함유N-당감건적결구역,소이DQ418454시Efp-Ⅰ중적일개신기인.재차기출상,구건료해기인적원핵표체재체pMAL-c2X-Efp-Ⅰ,병진행료전화、유도화표체.Western blotting증명,표체산물동시구유MBP화Efp-Ⅰ적항원특이성,시MBP화Efp-Ⅰ적융합단백(MBP-EfP-Ⅰ).경친화층석분리순화적MBP-EfP-Ⅰ,재락단백평판화섬유단백평판상표현출명현적섬용매활성.