上海交通大学学报（农业科学版）
上海交通大學學報（農業科學版）
상해교통대학학보（농업과학판）
JOURNAL OF SHANGHAI JIAOTONG UNIVERSITY(AGRICULTURAL SCIENCE)
2008年
3期
233-236,241
,共5页
人溶菌酶%毕赤酵母%生物活性
人溶菌酶%畢赤酵母%生物活性
인용균매%필적효모%생물활성
将化学合成的人溶茵酶基因舰hLYZ(444 bp)构建到毕赤酵母分泌型表达载体pPICZ上;载体质粒用Sac I线性化后电击法转化毕赤酵母菌株GS115.在舍Zeocin的抗性培养基筛选后PCR鉴定获得了9株重组菌株.重组菌株经甲醇诱导后取表达上清液进行SDS-PAGE电泳和Western blot分析.结果显示,重组hLYZ在毕赤酵母中成功表达,在诱导60 h时表达量最高.用镍亲和层析柱纯化重组hLYZ,用Bradford法测得其含量约为324 mg·L-1.比浊法活性测定结果显示所表达的重组人溶茵酶活性达到4473 U.mL-1.本研究利用毕赤酵母分泌型表达载体成功表达了重组人溶菌酶,并探索了简单有效的纯化和活性测定方法,为利用毕赤酵母系统规模化生产重组人溶菌酶奠定了技术基础.
將化學閤成的人溶茵酶基因艦hLYZ(444 bp)構建到畢赤酵母分泌型錶達載體pPICZ上;載體質粒用Sac I線性化後電擊法轉化畢赤酵母菌株GS115.在捨Zeocin的抗性培養基篩選後PCR鑒定穫得瞭9株重組菌株.重組菌株經甲醇誘導後取錶達上清液進行SDS-PAGE電泳和Western blot分析.結果顯示,重組hLYZ在畢赤酵母中成功錶達,在誘導60 h時錶達量最高.用鎳親和層析柱純化重組hLYZ,用Bradford法測得其含量約為324 mg·L-1.比濁法活性測定結果顯示所錶達的重組人溶茵酶活性達到4473 U.mL-1.本研究利用畢赤酵母分泌型錶達載體成功錶達瞭重組人溶菌酶,併探索瞭簡單有效的純化和活性測定方法,為利用畢赤酵母繫統規模化生產重組人溶菌酶奠定瞭技術基礎.
장화학합성적인용인매기인함hLYZ(444 bp)구건도필적효모분비형표체재체pPICZ상;재체질립용Sac I선성화후전격법전화필적효모균주GS115.재사Zeocin적항성배양기사선후PCR감정획득료9주중조균주.중조균주경갑순유도후취표체상청액진행SDS-PAGE전영화Western blot분석.결과현시,중조hLYZ재필적효모중성공표체,재유도60 h시표체량최고.용얼친화층석주순화중조hLYZ,용Bradford법측득기함량약위324 mg·L-1.비탁법활성측정결과현시소표체적중조인용인매활성체도4473 U.mL-1.본연구이용필적효모분비형표체재체성공표체료중조인용균매,병탐색료간단유효적순화화활성측정방법,위이용필적효모계통규모화생산중조인용균매전정료기술기출.
