草业学报
草業學報
초업학보
PRATACULTURAL SCIENCE
2011年
5期
126-132
,共7页
韩明鹏%王彦华%高永革%张晓霞%苏芳蕊%许红%王成章
韓明鵬%王彥華%高永革%張曉霞%囌芳蕊%許紅%王成章
한명붕%왕언화%고영혁%장효하%소방예%허홍%왕성장
紫花苜蓿%抑制消减杂交%高温胁迫
紫花苜蓿%抑製消減雜交%高溫脅迫
자화목숙%억제소감잡교%고온협박
为分离和获得紫花苜蓿高温胁迫诱导相关基因片段的EST序列.以秋眠6级的紫花苜蓿品种(ABI 700)为材料,以45℃高温胁迫下的紫花苜蓿幼嫩茎叶cDNA为试验方(tester),以正常生长(22℃)的紫花苜蓿幼嫩茎叶cDNA为驱动方(driver),利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization,SSH)构建了高温胁迫下紫花苜蓿幼嫩茎叶的正向抑制消减文库.从消减文库中随机挑取120个阳性克隆,进行菌液PCR鉴定.结果显示,消减文库的滴度为4 230 pfu/mL,重组率为97.8％,插入片段大小主要集中在300～750 bp.本研究为紫花苜蓿抗热基因克隆和系统研究高温胁迫下紫花苜蓿基因的表达奠定了一定的理论基础.
為分離和穫得紫花苜蓿高溫脅迫誘導相關基因片段的EST序列.以鞦眠6級的紫花苜蓿品種(ABI 700)為材料,以45℃高溫脅迫下的紫花苜蓿幼嫩莖葉cDNA為試驗方(tester),以正常生長(22℃)的紫花苜蓿幼嫩莖葉cDNA為驅動方(driver),利用抑製性消減雜交技術(suppression subtractive hybridization,SSH)構建瞭高溫脅迫下紫花苜蓿幼嫩莖葉的正嚮抑製消減文庫.從消減文庫中隨機挑取120箇暘性剋隆,進行菌液PCR鑒定.結果顯示,消減文庫的滴度為4 230 pfu/mL,重組率為97.8％,插入片段大小主要集中在300～750 bp.本研究為紫花苜蓿抗熱基因剋隆和繫統研究高溫脅迫下紫花苜蓿基因的錶達奠定瞭一定的理論基礎.
위분리화획득자화목숙고온협박유도상관기인편단적EST서렬.이추면6급적자화목숙품충(ABI 700)위재료,이45℃고온협박하적자화목숙유눈경협cDNA위시험방(tester),이정상생장(22℃)적자화목숙유눈경협cDNA위구동방(driver),이용억제성소감잡교기술(suppression subtractive hybridization,SSH)구건료고온협박하자화목숙유눈경협적정향억제소감문고.종소감문고중수궤도취120개양성극륭,진행균액PCR감정.결과현시,소감문고적적도위4 230 pfu/mL,중조솔위97.8％,삽입편단대소주요집중재300～750 bp.본연구위자화목숙항열기인극륭화계통연구고온협박하자화목숙기인적표체전정료일정적이론기출.
