中国兽医科技
中國獸醫科技
중국수의과기
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE AND TECHNOLOGY
2000年
10期
8-11
,共4页
唐雨德%顾志香%刘玉%周宗安%罗涵禄%郁兴明%陶开华%翟春生
唐雨德%顧誌香%劉玉%週宗安%囉涵祿%鬱興明%陶開華%翟春生
당우덕%고지향%류옥%주종안%라함록%욱흥명%도개화%적춘생
猪囊虫病%基因工程疫苗%生产工艺
豬囊蟲病%基因工程疫苗%生產工藝
저낭충병%기인공정역묘%생산공예
从重组抗原的表达、复性与纯化、疫苗的配制及疫苗的质量控制等4个方面对猪囊虫病基因工程疫苗的生产工艺进行了探索.确定重组抗原表达的最佳培养液为LB磷酸盐培养液,诱导剂为10g/L乳糖,并根据接种量、溶解氧、罐压、发酵时间等对发酵结果的影响,确定了发酵培养的最佳条件.在重组抗原的复性与纯化方面,工程菌的裂解条件为先用溶菌酶感作再用超声波破菌,超声强度为240W 5次;包涵体的纯化先采用低浓度的尿素洗涤2次,再以5 g/L Triton X-100洗涤1遍,包涵体纯度可达50%以上;重组抗原的复性以静置缓慢透析或分步稀释法为佳,复性液为含2 mol/L尿素、160μmol/L PEG 4000、1.0 mmol/L GSH、0.1 mmol/L GSSG的pH 9.0 50 mmol/L Tris-HCl、1 mmol/L EDTA缓冲液;重组抗原的纯化采用分子筛凝胶层析和离子交换凝胶层析的色谱组合,重组抗原的纯度达90%以上.此外对该疫苗进行了中试生产,共生产7批,产品全部合格,表明该生产工艺稳定,可批量化生产.
從重組抗原的錶達、複性與純化、疫苗的配製及疫苗的質量控製等4箇方麵對豬囊蟲病基因工程疫苗的生產工藝進行瞭探索.確定重組抗原錶達的最佳培養液為LB燐痠鹽培養液,誘導劑為10g/L乳糖,併根據接種量、溶解氧、罐壓、髮酵時間等對髮酵結果的影響,確定瞭髮酵培養的最佳條件.在重組抗原的複性與純化方麵,工程菌的裂解條件為先用溶菌酶感作再用超聲波破菌,超聲彊度為240W 5次;包涵體的純化先採用低濃度的尿素洗滌2次,再以5 g/L Triton X-100洗滌1遍,包涵體純度可達50%以上;重組抗原的複性以靜置緩慢透析或分步稀釋法為佳,複性液為含2 mol/L尿素、160μmol/L PEG 4000、1.0 mmol/L GSH、0.1 mmol/L GSSG的pH 9.0 50 mmol/L Tris-HCl、1 mmol/L EDTA緩遲液;重組抗原的純化採用分子篩凝膠層析和離子交換凝膠層析的色譜組閤,重組抗原的純度達90%以上.此外對該疫苗進行瞭中試生產,共生產7批,產品全部閤格,錶明該生產工藝穩定,可批量化生產.
종중조항원적표체、복성여순화、역묘적배제급역묘적질량공제등4개방면대저낭충병기인공정역묘적생산공예진행료탐색.학정중조항원표체적최가배양액위LB린산염배양액,유도제위10g/L유당,병근거접충량、용해양、관압、발효시간등대발효결과적영향,학정료발효배양적최가조건.재중조항원적복성여순화방면,공정균적렬해조건위선용용균매감작재용초성파파균,초성강도위240W 5차;포함체적순화선채용저농도적뇨소세조2차,재이5 g/L Triton X-100세조1편,포함체순도가체50%이상;중조항원적복성이정치완만투석혹분보희석법위가,복성액위함2 mol/L뇨소、160μmol/L PEG 4000、1.0 mmol/L GSH、0.1 mmol/L GSSG적pH 9.0 50 mmol/L Tris-HCl、1 mmol/L EDTA완충액;중조항원적순화채용분자사응효층석화리자교환응효층석적색보조합,중조항원적순도체90%이상.차외대해역묘진행료중시생산,공생산7비,산품전부합격,표명해생산공예은정,가비양화생산.
