微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2005年
1期
121-124
,共4页
方再光%黄惠琴%张开山%潘志强%鲍时翔
方再光%黃惠琴%張開山%潘誌彊%鮑時翔
방재광%황혜금%장개산%반지강%포시상
海绵Pachychalina sp.,16S rDNA,ARDRA,古菌多样性
海綿Pachychalina sp.,16S rDNA,ARDRA,古菌多樣性
해면Pachychalina sp.,16S rDNA,ARDRA,고균다양성
采用非分离培养分析方法,即16S rDNA限制性酶切片段长度多态性(ARDRA)和测序方法对南海湛江海域海绵Pachychalina sp.体内的古菌多样性进行了研究.从海绵体内直接提取古菌总DNA.以样品总DNA为模板,用古菌16S rDNA通用引物进行PCR扩增获得16S rDNA,回收、纯化16S rDNA产物并克隆到T-Vector.进行第二次PCR扩增反应,且对扩增产物进行ARDRA.在古菌16S rDNA的ARDRA图谱中,大多数克隆的酶切带谱上存在差异;随机挑选8个克隆子进行测序,获得古菌16S rDNA的部分序列,并对16S rDNA序列进行聚类分析构建了系统进化树,结果发现海绵体内的古菌主要属于Methanogenium organophilum、Methanoplanus petrolearius等古菌类.但它们与目前数据库中收录的古细菌间的相似性均不超过90%,它们极有可能是一些新的古菌.
採用非分離培養分析方法,即16S rDNA限製性酶切片段長度多態性(ARDRA)和測序方法對南海湛江海域海綿Pachychalina sp.體內的古菌多樣性進行瞭研究.從海綿體內直接提取古菌總DNA.以樣品總DNA為模闆,用古菌16S rDNA通用引物進行PCR擴增穫得16S rDNA,迴收、純化16S rDNA產物併剋隆到T-Vector.進行第二次PCR擴增反應,且對擴增產物進行ARDRA.在古菌16S rDNA的ARDRA圖譜中,大多數剋隆的酶切帶譜上存在差異;隨機挑選8箇剋隆子進行測序,穫得古菌16S rDNA的部分序列,併對16S rDNA序列進行聚類分析構建瞭繫統進化樹,結果髮現海綿體內的古菌主要屬于Methanogenium organophilum、Methanoplanus petrolearius等古菌類.但它們與目前數據庫中收錄的古細菌間的相似性均不超過90%,它們極有可能是一些新的古菌.
채용비분리배양분석방법,즉16S rDNA한제성매절편단장도다태성(ARDRA)화측서방법대남해담강해역해면Pachychalina sp.체내적고균다양성진행료연구.종해면체내직접제취고균총DNA.이양품총DNA위모판,용고균16S rDNA통용인물진행PCR확증획득16S rDNA,회수、순화16S rDNA산물병극륭도T-Vector.진행제이차PCR확증반응,차대확증산물진행ARDRA.재고균16S rDNA적ARDRA도보중,대다수극륭적매절대보상존재차이;수궤도선8개극륭자진행측서,획득고균16S rDNA적부분서렬,병대16S rDNA서렬진행취류분석구건료계통진화수,결과발현해면체내적고균주요속우Methanogenium organophilum、Methanoplanus petrolearius등고균류.단타문여목전수거고중수록적고세균간적상사성균불초과90%,타문겁유가능시일사신적고균.
