现代免疫学
現代免疫學
현대면역학
CURRENT IMMUNOLOGY
2005年
5期
398-401
,共4页
范华骅%郑滨%刘嬿%高跞%聂晓绚%高峰%陆华中
範華驊%鄭濱%劉嬿%高躒%聶曉絢%高峰%陸華中
범화화%정빈%류연%고력%섭효현%고봉%륙화중
自然杀伤T细胞%扩增%细胞因子%流式细胞术
自然殺傷T細胞%擴增%細胞因子%流式細胞術
자연살상T세포%확증%세포인자%류식세포술
为了建立人自然杀伤T(NKT)细胞在体外扩增的方法并对其功能进行初步的研究,通过不同的方法从人外周血单个核细胞(MNC)和纯化T淋巴细胞中扩增TCRVα24+/Vβ11+NKT细胞,并采用流式细胞术测定NKT细胞中IL-4、IFN-γ、TNF-α分泌水平.采用CD4/CD8免疫磁珠去除CD4+和CD8+细胞进一步纯化NKT细胞,并用DIOC18染色及流式细胞术测定NKT细胞杀伤活性.α半乳糖神经酰胺(α-Galcer)和IL-2可以使NKT细胞在体外扩增.扩增19 d后,TCRVα24+/Vβ11+细胞比率最高上升到25.5%±7.2%,NKT细胞最大扩增倍数达到(1.51±0.91)×104倍.体外扩增的NKT细胞高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56.在CD3单克隆抗体和IL-2刺激下,TCRVβ11+细胞分泌IL-4和IFN-γ的细胞比例均高于TCRVβ11-细胞(P＜0.05).去除CD4+和CD8+细胞后NKT细胞含量上升到80%.NKT细胞对肿瘤细胞株U937和HL60以及树突状细胞具有较强的细胞毒效应.NKT细胞可以通过α-Galcer直接从人外周血MNC扩增获得,从而简化实验步骤.
為瞭建立人自然殺傷T(NKT)細胞在體外擴增的方法併對其功能進行初步的研究,通過不同的方法從人外週血單箇覈細胞(MNC)和純化T淋巴細胞中擴增TCRVα24+/Vβ11+NKT細胞,併採用流式細胞術測定NKT細胞中IL-4、IFN-γ、TNF-α分泌水平.採用CD4/CD8免疫磁珠去除CD4+和CD8+細胞進一步純化NKT細胞,併用DIOC18染色及流式細胞術測定NKT細胞殺傷活性.α半乳糖神經酰胺(α-Galcer)和IL-2可以使NKT細胞在體外擴增.擴增19 d後,TCRVα24+/Vβ11+細胞比率最高上升到25.5%±7.2%,NKT細胞最大擴增倍數達到(1.51±0.91)×104倍.體外擴增的NKT細胞高錶達TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低錶達CD56.在CD3單剋隆抗體和IL-2刺激下,TCRVβ11+細胞分泌IL-4和IFN-γ的細胞比例均高于TCRVβ11-細胞(P＜0.05).去除CD4+和CD8+細胞後NKT細胞含量上升到80%.NKT細胞對腫瘤細胞株U937和HL60以及樹突狀細胞具有較彊的細胞毒效應.NKT細胞可以通過α-Galcer直接從人外週血MNC擴增穫得,從而簡化實驗步驟.
위료건립인자연살상T(NKT)세포재체외확증적방법병대기공능진행초보적연구,통과불동적방법종인외주혈단개핵세포(MNC)화순화T림파세포중확증TCRVα24+/Vβ11+NKT세포,병채용류식세포술측정NKT세포중IL-4、IFN-γ、TNF-α분비수평.채용CD4/CD8면역자주거제CD4+화CD8+세포진일보순화NKT세포,병용DIOC18염색급류식세포술측정NKT세포살상활성.α반유당신경선알(α-Galcer)화IL-2가이사NKT세포재체외확증.확증19 d후,TCRVα24+/Vβ11+세포비솔최고상승도25.5%±7.2%,NKT세포최대확증배수체도(1.51±0.91)×104배.체외확증적NKT세포고표체TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,저표체CD56.재CD3단극륭항체화IL-2자격하,TCRVβ11+세포분비IL-4화IFN-γ적세포비례균고우TCRVβ11-세포(P＜0.05).거제CD4+화CD8+세포후NKT세포함량상승도80%.NKT세포대종류세포주U937화HL60이급수돌상세포구유교강적세포독효응.NKT세포가이통과α-Galcer직접종인외주혈MNC확증획득,종이간화실험보취.
