动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2005年
9期
50-54
,共5页
杜建%王志亮%宋厚辉%金宁一%张念祖
杜建%王誌亮%宋厚輝%金寧一%張唸祖
두건%왕지량%송후휘%금저일%장념조
马动脉炎病毒%核衣壳蛋白基因%克隆%原核表达
馬動脈炎病毒%覈衣殼蛋白基因%剋隆%原覈錶達
마동맥염병독%핵의각단백기인%극륭%원핵표체
采用RT-PCR方法扩增出马动脉炎病毒核衣壳蛋白基因ORF7,并将其克隆到pMD18-T载体,构建成重组质粒pMD18-N,在上海生物工程公司测序.结果表明,所克隆的核衣壳蛋白基因序列与EAV NC-002532株的同源性为99%.表明ORF7是EAV基因组内的保守序列,将ORF7亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组质粒pGEX-6P-N,用pGEX-6P-N转化表达菌株BL21(DE3),诱导表达后SDS-PAGE和Western blotting分析表明,克隆在谷胱苷肽硫转移酶(GST)下游的核衣壳蛋白基因与GST获得了高效融合表达,表达的融合蛋白GST-N分子质量约为40 ku,为马动脉炎病毒病血清学诊断方法的建立奠定了基础.
採用RT-PCR方法擴增齣馬動脈炎病毒覈衣殼蛋白基因ORF7,併將其剋隆到pMD18-T載體,構建成重組質粒pMD18-N,在上海生物工程公司測序.結果錶明,所剋隆的覈衣殼蛋白基因序列與EAV NC-002532株的同源性為99%.錶明ORF7是EAV基因組內的保守序列,將ORF7亞剋隆到原覈錶達載體pGEX-6P-1中,構建成重組質粒pGEX-6P-N,用pGEX-6P-N轉化錶達菌株BL21(DE3),誘導錶達後SDS-PAGE和Western blotting分析錶明,剋隆在穀胱苷肽硫轉移酶(GST)下遊的覈衣殼蛋白基因與GST穫得瞭高效融閤錶達,錶達的融閤蛋白GST-N分子質量約為40 ku,為馬動脈炎病毒病血清學診斷方法的建立奠定瞭基礎.
채용RT-PCR방법확증출마동맥염병독핵의각단백기인ORF7,병장기극륭도pMD18-T재체,구건성중조질립pMD18-N,재상해생물공정공사측서.결과표명,소극륭적핵의각단백기인서렬여EAV NC-002532주적동원성위99%.표명ORF7시EAV기인조내적보수서렬,장ORF7아극륭도원핵표체재체pGEX-6P-1중,구건성중조질립pGEX-6P-N,용pGEX-6P-N전화표체균주BL21(DE3),유도표체후SDS-PAGE화Western blotting분석표명,극륭재곡광감태류전이매(GST)하유적핵의각단백기인여GST획득료고효융합표체,표체적융합단백GST-N분자질량약위40 ku,위마동맥염병독병혈청학진단방법적건립전정료기출.
