细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2009年
2期
158-160,163
,共4页
吴春铃%包红霞%唐晓波%朱大岭
吳春鈴%包紅霞%唐曉波%硃大嶺
오춘령%포홍하%당효파%주대령
hCE-Ⅱ%原核表达%融合蛋白%多克隆抗体
hCE-Ⅱ%原覈錶達%融閤蛋白%多剋隆抗體
hCE-Ⅱ%원핵표체%융합단백%다극륭항체
目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定.方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His).在宿主菌BL21内进行诱导表达,hCE-Ⅱ-GST融合蛋白作为免疫原免疫大耳白兔,用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用间接ELISA、West-ern blot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性.结果:成功制备了抗hCE-Ⅱ的多克隆抗体.Western blot鉴定表明该抗体可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白.免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性结合肝包浆中的hCE-Ⅱ蛋白,而不与血管平滑肌细胞结合.结论:制备的pAb有较高的效价和较好的特异性,为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础.
目的:構建人羧痠酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原覈錶達質粒併在大腸桿菌中錶達,製備多剋隆抗體(pAb),併對其特性進行初步鑒定.方法:以人正常肝cDNA文庫為模闆,構建重組錶達質粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His).在宿主菌BL21內進行誘導錶達,hCE-Ⅱ-GST融閤蛋白作為免疫原免疫大耳白兔,用辛痠-硫痠銨分步沉澱法初步純化抗血清,併用間接ELISA、West-ern blot及免疫組化檢測抗體的靈敏度和特異性.結果:成功製備瞭抗hCE-Ⅱ的多剋隆抗體.Western blot鑒定錶明該抗體可特異性識彆重組蛋白以及天然的人肝微粒體蛋白.免疫組織化學鑒定顯示該抗體可特異性結閤肝包漿中的hCE-Ⅱ蛋白,而不與血管平滑肌細胞結閤.結論:製備的pAb有較高的效價和較好的特異性,為肝癌診斷試劑盒的研究奠定瞭實驗基礎.
목적:구건인최산지매-Ⅱ(hCE-Ⅱ)원핵표체질립병재대장간균중표체,제비다극륭항체(pAb),병대기특성진행초보감정.방법:이인정상간cDNA문고위모판,구건중조표체질립pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(즉hCE-Ⅱ-GST)화pET-32a-hCE-Ⅱ(즉hCE-Ⅱ-His).재숙주균BL21내진행유도표체,hCE-Ⅱ-GST융합단백작위면역원면역대이백토,용신산-류산안분보침정법초보순화항혈청,병용간접ELISA、West-ern blot급면역조화검측항체적령민도화특이성.결과:성공제비료항hCE-Ⅱ적다극륭항체.Western blot감정표명해항체가특이성식별중조단백이급천연적인간미립체단백.면역조직화학감정현시해항체가특이성결합간포장중적hCE-Ⅱ단백,이불여혈관평활기세포결합.결론:제비적pAb유교고적효개화교호적특이성,위간암진단시제합적연구전정료실험기출.
