CAJ | 학술논문

目的构建Survivin-siRNA真核重组质粒,转染裸鼠视网膜母细胞瘤玻璃体腔移植瘤中,探讨其对肿瘤组织中Survivin表达的抑制作用及诱导凋亡情况.方法构建针对Survivin mRNA 特异的靶序列的Survivin-siRNA以及对照 Scramble-siRNA.将Y79细胞种植至21只裸鼠玻璃体腔内,9 d后随机平均分为mock对照组(注射 K-PBS);Scramble对照组(注射带有非同源的Scramble-siRNA重组质粒);Survivin实验组(注射特异性Survivin-siRNA重组质粒).10 d后摘除肿瘤组织,利用半定量RT-PCR检测肿瘤组织Survivin mRNA;采用Western blot方法分析Survivin蛋白;HE染色、Survivin及Ki67免疫组化染色;TUNEL法检测肿瘤组织凋亡.结果真核重组质粒及视网膜母细胞瘤裸鼠玻璃体腔移植瘤模型均构建成功.半定量RT-PCR显示Survivin-siRNA在mRNA水平上抑制了Survivin基因转录(P＜0.01),Scramble组与mock组无差别(P＞0.05).Western blot显示与mock组和Scramble组相比,实验组细胞的Survivin蛋白表达显著降低(P＜0.01).HE染色普通光镜下观察,实验组与两对照组相比,在瘤组织内可见到较多死亡细胞;实验组移植瘤组织中Survivin蛋白表达与mock组和scramble组相比明显下降;实验组Ki67的表达较对照组下降明显,增殖指数明显下降(P＜0.01).TUNEL法显示实验组肿瘤组织内可见大量细胞核染为棕黄色的凋亡细胞,对照组可见少许凋亡细胞,实验组凋亡指数明显高于对照组(P＜0.01).结论成功构建的Survivin-siRNA重组质粒可以抑制裸鼠视网膜母细胞瘤移植瘤中Survivin基因转录和蛋白表达,诱导了肿瘤细胞凋亡.
목적 구건Survivin-siRNA진핵중조질립,전염라서시망막모세포류파리체강이식류중,탐토기대종류조직중Survivin표체적억제작용급유도조망정황.방법 구건침대Survivin mRNA 특이적파서렬적Survivin-siRNA이급대조 Scramble-siRNA.장Y79세포충식지21지라서파리체강내,9 d후수궤평균분위mock대조조(주사 K-PBS);Scramble대조조(주사대유비동원적Scramble-siRNA중조질립);Survivin실험조(주사특이성Survivin-siRNA중조질립).10 d후적제종류조직,이용반정량RT-PCR검측종류조직Survivin mRNA;채용Western blot방법분석Survivin단백;HE염색、Survivin급Ki67면역조화염색;TUNEL법검측종류조직조망.결과 진핵중조질립급시망막모세포류라서파리체강이식류모형균구건성공.반정량RT-PCR현시Survivin-siRNA재mRNA수평상억제료Survivin기인전록(P＜0.01),Scramble조여mock조무차별(P＞0.05).Western blot현시여mock조화Scramble조상비,실험조세포적Survivin단백표체현저강저(P＜0.01).HE염색보통광경하관찰,실험조여량대조조상비,재류조직내가견도교다사망세포;실험조이식류조직중Survivin단백표체여mock조화scramble조상비명현하강;실험조Ki67적표체교대조조하강명현,증식지수명현하강(P＜0.01).TUNEL법현시실험조종류조직내가견대량세포핵염위종황색적조망세포,대조조가견소허조망세포,실험조조망지수명현고우대조조(P＜0.01).결론 성공구건적Survivin-siRNA중조질립가이억제라서시망막모세포류이식류중Survivin기인전록화단백표체,유도료종류세포조망.