中国兽医杂志
中國獸醫雜誌
중국수의잡지
CHINESE JOURNAL OF VETERINARY MEDICINE
2010年
5期
3-5
,共3页
王志刚%神翠翠%彭金山%黄瑛%尹晓敏%赵德明
王誌剛%神翠翠%彭金山%黃瑛%尹曉敏%趙德明
왕지강%신취취%팽금산%황영%윤효민%조덕명
牛分枝杆菌%MPB70基因%克隆%原核表达%免疫印迹%蛋白纯化
牛分枝桿菌%MPB70基因%剋隆%原覈錶達%免疫印跡%蛋白純化
우분지간균%MPB70기인%극륭%원핵표체%면역인적%단백순화
以牛分枝杆菌DNA为模板,克隆了牛分枝杆菌MPB70基因,构建了克隆载体pGEM-MPB70和表达载体pET30a-MPB70,经IPTG诱导在大肠杆菌BL-21中表达,用SDS-PAGE和免疫印迹分析表达产物并进行蛋白纯化.试验结果表明,牛分枝杆菌MPB70基因体外扩增产物与预期值相符,约582 bp;所构建表达质粒pET30a-MPB70经测序,结果与预期一致;SDS-PAGE分析表明,该融合蛋白以包涵体的形式表达,其分子质量约为29 kD,蛋白表达量约占菌体总蛋白的20%;该蛋白经电洗脱纯化后,纯度达85%以上;免疫印迹分析表明,原核表达的融合蛋白可与兔抗牛分枝杆菌多克隆抗体结合,并且具特异的免疫反应性.
以牛分枝桿菌DNA為模闆,剋隆瞭牛分枝桿菌MPB70基因,構建瞭剋隆載體pGEM-MPB70和錶達載體pET30a-MPB70,經IPTG誘導在大腸桿菌BL-21中錶達,用SDS-PAGE和免疫印跡分析錶達產物併進行蛋白純化.試驗結果錶明,牛分枝桿菌MPB70基因體外擴增產物與預期值相符,約582 bp;所構建錶達質粒pET30a-MPB70經測序,結果與預期一緻;SDS-PAGE分析錶明,該融閤蛋白以包涵體的形式錶達,其分子質量約為29 kD,蛋白錶達量約佔菌體總蛋白的20%;該蛋白經電洗脫純化後,純度達85%以上;免疫印跡分析錶明,原覈錶達的融閤蛋白可與兔抗牛分枝桿菌多剋隆抗體結閤,併且具特異的免疫反應性.
이우분지간균DNA위모판,극륭료우분지간균MPB70기인,구건료극륭재체pGEM-MPB70화표체재체pET30a-MPB70,경IPTG유도재대장간균BL-21중표체,용SDS-PAGE화면역인적분석표체산물병진행단백순화.시험결과표명,우분지간균MPB70기인체외확증산물여예기치상부,약582 bp;소구건표체질립pET30a-MPB70경측서,결과여예기일치;SDS-PAGE분석표명,해융합단백이포함체적형식표체,기분자질량약위29 kD,단백표체량약점균체총단백적20%;해단백경전세탈순화후,순도체85%이상;면역인적분석표명,원핵표체적융합단백가여토항우분지간균다극륭항체결합,병차구특이적면역반응성.
