畜牧与兽医
畜牧與獸醫
축목여수의
ANIMAL HUSBANDRY & VETERINARY MEDICINE
2010年
7期
50-52
,共3页
宫强%牛明福%秦翠丽%孙晓菲%王帅涛%曲宁
宮彊%牛明福%秦翠麗%孫曉菲%王帥濤%麯寧
궁강%우명복%진취려%손효비%왕수도%곡저
禽多杀性巴氏杆菌%外膜蛋白H基因(omph)%表达
禽多殺性巴氏桿菌%外膜蛋白H基因(omph)%錶達
금다살성파씨간균%외막단백H기인(omph)%표체
利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1050 bp的外膜蛋白H基因(omph)片段,克隆到pMD18-T上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pOMPH,将该重组质粒体外转染SP2/0细胞,检测其表达情况.结果表明本试验成功构建了真核表达质粒pOMPH,通过RT-PCR由转染了重组质粒的SP2/0细胞中扩增出了目的条带,Westem blotting分析结果显示重组质粒pOMPH转染的SP2/0细胞泳道出现38 ku的特异条带,间接免疫荧光分析表明在转染了pOMPH的SP2/0细胞中出现绿色荧光,说明.omph基因在SP2/0细胞中成功表达了活性蛋白,从而为进一步研制DNA疫苗奠定了基础.
利用PCR技術擴增齣禽多殺性巴氏桿菌1050 bp的外膜蛋白H基因(omph)片段,剋隆到pMD18-T上,再亞剋隆到真覈載體pcDNA3.1(+)上,構建重組質粒pOMPH,將該重組質粒體外轉染SP2/0細胞,檢測其錶達情況.結果錶明本試驗成功構建瞭真覈錶達質粒pOMPH,通過RT-PCR由轉染瞭重組質粒的SP2/0細胞中擴增齣瞭目的條帶,Westem blotting分析結果顯示重組質粒pOMPH轉染的SP2/0細胞泳道齣現38 ku的特異條帶,間接免疫熒光分析錶明在轉染瞭pOMPH的SP2/0細胞中齣現綠色熒光,說明.omph基因在SP2/0細胞中成功錶達瞭活性蛋白,從而為進一步研製DNA疫苗奠定瞭基礎.
이용PCR기술확증출금다살성파씨간균1050 bp적외막단백H기인(omph)편단,극륭도pMD18-T상,재아극륭도진핵재체pcDNA3.1(+)상,구건중조질립pOMPH,장해중조질립체외전염SP2/0세포,검측기표체정황.결과표명본시험성공구건료진핵표체질립pOMPH,통과RT-PCR유전염료중조질립적SP2/0세포중확증출료목적조대,Westem blotting분석결과현시중조질립pOMPH전염적SP2/0세포영도출현38 ku적특이조대,간접면역형광분석표명재전염료pOMPH적SP2/0세포중출현록색형광,설명.omph기인재SP2/0세포중성공표체료활성단백,종이위진일보연제DNA역묘전정료기출.
