临床肿瘤学杂志
臨床腫瘤學雜誌
림상종류학잡지
CHINESE CLINICAL ONCOLOGY
2011年
4期
289-293
,共5页
何建明%江恒%庞学利%肖红%陈克力%胡绍毅%黄海辉%梁后杰
何建明%江恆%龐學利%肖紅%陳剋力%鬍紹毅%黃海輝%樑後傑
하건명%강항%방학리%초홍%진극력%호소의%황해휘%량후걸
结肠癌%整合素%逆转录病毒%RNAi
結腸癌%整閤素%逆轉錄病毒%RNAi
결장암%정합소%역전록병독%RNAi
目的 探讨逆转录病毒介导RNA干扰(RNAi)稳定抑制αv整合素表达的有效性,并建立稳定抑制αv整合素表达的结肠癌HT-29细胞系.方法 设计并合成3对针对αv整合素基因的短发夹RNA(shRNA)序列,构建逆转录病毒质粒;脂质体转染逆转录病毒质粒至结肠癌细胞株HT-29;G418筛选,局部消化法挑选阳性克隆;Western blotting检测蛋白表达水平.结果 琼脂糖凝胶电泳结果显示,构建成功的逆转录病毒载体被HindⅢ限制性内切酶切为两个分别长1950bp与5800 bp片段.测序结果显示,针对αv整合素基因的3对shRNA序列皆成功插入逆转录病毒质粒;转染逆转录病毒载体的HT-29细胞持续表达绿色荧光蛋白,并对G418具抗性;Western blotting结果显示逆转录病毒介导的shRNA能有效地抑制αv整合素表达.结论 逆转录病毒介导的shRNA能够高效、稳定地抑制αv整合素表达,进而可以建立稳定干扰αv整合素表达的结肠癌HT-29细胞系.
目的 探討逆轉錄病毒介導RNA榦擾(RNAi)穩定抑製αv整閤素錶達的有效性,併建立穩定抑製αv整閤素錶達的結腸癌HT-29細胞繫.方法 設計併閤成3對針對αv整閤素基因的短髮夾RNA(shRNA)序列,構建逆轉錄病毒質粒;脂質體轉染逆轉錄病毒質粒至結腸癌細胞株HT-29;G418篩選,跼部消化法挑選暘性剋隆;Western blotting檢測蛋白錶達水平.結果 瓊脂糖凝膠電泳結果顯示,構建成功的逆轉錄病毒載體被HindⅢ限製性內切酶切為兩箇分彆長1950bp與5800 bp片段.測序結果顯示,針對αv整閤素基因的3對shRNA序列皆成功插入逆轉錄病毒質粒;轉染逆轉錄病毒載體的HT-29細胞持續錶達綠色熒光蛋白,併對G418具抗性;Western blotting結果顯示逆轉錄病毒介導的shRNA能有效地抑製αv整閤素錶達.結論 逆轉錄病毒介導的shRNA能夠高效、穩定地抑製αv整閤素錶達,進而可以建立穩定榦擾αv整閤素錶達的結腸癌HT-29細胞繫.
목적 탐토역전록병독개도RNA간우(RNAi)은정억제αv정합소표체적유효성,병건립은정억제αv정합소표체적결장암HT-29세포계.방법 설계병합성3대침대αv정합소기인적단발협RNA(shRNA)서렬,구건역전록병독질립;지질체전염역전록병독질립지결장암세포주HT-29;G418사선,국부소화법도선양성극륭;Western blotting검측단백표체수평.결과 경지당응효전영결과현시,구건성공적역전록병독재체피HindⅢ한제성내절매절위량개분별장1950bp여5800 bp편단.측서결과현시,침대αv정합소기인적3대shRNA서렬개성공삽입역전록병독질립;전염역전록병독재체적HT-29세포지속표체록색형광단백,병대G418구항성;Western blotting결과현시역전록병독개도적shRNA능유효지억제αv정합소표체.결론 역전록병독개도적shRNA능구고효、은정지억제αv정합소표체,진이가이건립은정간우αv정합소표체적결장암HT-29세포계.
