内蒙古农业大学学报（自然科学版）
內矇古農業大學學報（自然科學版）
내몽고농업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF INNER MONGOLIA AGRICULTURAL UNIIVERSITY
2011年
1期
7-12
,共6页
黄志强%张学东%丁壮%张泉鹏%宣华
黃誌彊%張學東%丁壯%張泉鵬%宣華
황지강%장학동%정장%장천붕%선화
猪繁殖与呼吸综合征病毒%Nsp9基因%克隆序列分析%原核表达
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%Nsp9基因%剋隆序列分析%原覈錶達
저번식여호흡종합정병독%Nsp9기인%극륭서렬분석%원핵표체
根据猪繁殖与呼吸综合征病毒BJ-4株及变异毒株(HB-1、SY0608、HN-HW、HuN4等)的核苷酸序列,利用Primer软件设计合成针对PRRSV Nsp9基因保守区域的特异性引物.用RT-PCR方法扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒JL/07/SW株Nsp9基因片段,克隆到pMD18-T载体并测序,基因克隆至表达载体pET-28a(+),得到重组表达载体pET-28a-Nsp9,转化BL21(DE3)细胞.经IPTG诱导,Nsp9蛋白以包涵体形式表达,SDS-PAGE分析表明重组蛋白的分子量约为34.8 kD,表达量占菌体蛋白的40.32%.Western-Blotting结果表明重组蛋白可被PRRSV阳性血清所识别.表达的重组蛋白为进一步制备抗Nsp9单抗及建立区分野毒和灭活毒感染的ELISA方法提供物质基础.
根據豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒BJ-4株及變異毒株(HB-1、SY0608、HN-HW、HuN4等)的覈苷痠序列,利用Primer軟件設計閤成針對PRRSV Nsp9基因保守區域的特異性引物.用RT-PCR方法擴增齣豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒JL/07/SW株Nsp9基因片段,剋隆到pMD18-T載體併測序,基因剋隆至錶達載體pET-28a(+),得到重組錶達載體pET-28a-Nsp9,轉化BL21(DE3)細胞.經IPTG誘導,Nsp9蛋白以包涵體形式錶達,SDS-PAGE分析錶明重組蛋白的分子量約為34.8 kD,錶達量佔菌體蛋白的40.32%.Western-Blotting結果錶明重組蛋白可被PRRSV暘性血清所識彆.錶達的重組蛋白為進一步製備抗Nsp9單抗及建立區分野毒和滅活毒感染的ELISA方法提供物質基礎.
근거저번식여호흡종합정병독BJ-4주급변이독주(HB-1、SY0608、HN-HW、HuN4등)적핵감산서렬,이용Primer연건설계합성침대PRRSV Nsp9기인보수구역적특이성인물.용RT-PCR방법확증출저번식여호흡종합정병독JL/07/SW주Nsp9기인편단,극륭도pMD18-T재체병측서,기인극륭지표체재체pET-28a(+),득도중조표체재체pET-28a-Nsp9,전화BL21(DE3)세포.경IPTG유도,Nsp9단백이포함체형식표체,SDS-PAGE분석표명중조단백적분자량약위34.8 kD,표체량점균체단백적40.32%.Western-Blotting결과표명중조단백가피PRRSV양성혈청소식별.표체적중조단백위진일보제비항Nsp9단항급건립구분야독화멸활독감염적ELISA방법제공물질기출.
