生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2011年
5期
679-682
,共4页
孙利%王晓辉%关薇%唐刘君%王建%杨晓明%汪思应
孫利%王曉輝%關薇%唐劉君%王建%楊曉明%汪思應
손리%왕효휘%관미%당류군%왕건%양효명%왕사응
肿瘤坏死因子受体相关因子6%原核表达%蛋白纯化
腫瘤壞死因子受體相關因子6%原覈錶達%蛋白純化
종류배사인자수체상관인자6%원핵표체%단백순화
目的:在大肠杆菌中表达肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)与GST的融合蛋白并进行纯化.方法:采用PCR方法从肝文库中扩增编码TRAF6的DNA片段,将其插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建GST-TRAF6原核表达载体,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达；用谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化表达的GST-TRAF6融合蛋白.结果:酶切鉴定和测序分析显示,长为1569 bp的TRAF6 DNA片段在pGEX-4T-2-TRAF6中的碱基序列、插入位点及读框正确,且位于表达载体的GST序列下游；经IPTG最佳浓度0.5 mmol/L诱导表达、亲和纯化后,获得了相对分子质量约85×103的GST-TRAF6融合蛋白.结论:构建了重组GST-TRAF6原核表达载体,获得了GST-TRAF6的大肠杆菌BL21表达菌株及GST-TRAF6融合蛋白,利于深入研究TRAF6的功能.
目的:在大腸桿菌中錶達腫瘤壞死因子受體相關因子6(TRAF6)與GST的融閤蛋白併進行純化.方法:採用PCR方法從肝文庫中擴增編碼TRAF6的DNA片段,將其插入原覈錶達載體pGEX-4T-2,構建GST-TRAF6原覈錶達載體,併轉入大腸桿菌BL21(DE3)中,用IPTG誘導錶達；用穀胱甘肽-瓊脂糖珠親和純化錶達的GST-TRAF6融閤蛋白.結果:酶切鑒定和測序分析顯示,長為1569 bp的TRAF6 DNA片段在pGEX-4T-2-TRAF6中的堿基序列、插入位點及讀框正確,且位于錶達載體的GST序列下遊；經IPTG最佳濃度0.5 mmol/L誘導錶達、親和純化後,穫得瞭相對分子質量約85×103的GST-TRAF6融閤蛋白.結論:構建瞭重組GST-TRAF6原覈錶達載體,穫得瞭GST-TRAF6的大腸桿菌BL21錶達菌株及GST-TRAF6融閤蛋白,利于深入研究TRAF6的功能.
목적:재대장간균중표체종류배사인자수체상관인자6(TRAF6)여GST적융합단백병진행순화.방법:채용PCR방법종간문고중확증편마TRAF6적DNA편단,장기삽입원핵표체재체pGEX-4T-2,구건GST-TRAF6원핵표체재체,병전입대장간균BL21(DE3)중,용IPTG유도표체；용곡광감태-경지당주친화순화표체적GST-TRAF6융합단백.결과:매절감정화측서분석현시,장위1569 bp적TRAF6 DNA편단재pGEX-4T-2-TRAF6중적감기서렬、삽입위점급독광정학,차위우표체재체적GST서렬하유；경IPTG최가농도0.5 mmol/L유도표체、친화순화후,획득료상대분자질량약85×103적GST-TRAF6융합단백.결론:구건료중조GST-TRAF6원핵표체재체,획득료GST-TRAF6적대장간균BL21표체균주급GST-TRAF6융합단백,리우심입연구TRAF6적공능.
