CAJ | 학술논문

利用反向长距离PCR技术从银耳(Tremella fuciformis)芽孢gpd基因出发克隆上游gpd启动子序列,将预测的gpd启动子片段与多功能纤维素基因(mfc)连接构建表达载体,与潮霉素抗性质粒pBgGl-hph共转化银耳芽孢,对拟共转化子进行酶活发酵试验.结果表明:4轮反向长距离PCR克隆得到了1761 bp的上游序列,经预测启动子落在上游1000 bp左右区域内,包含两个高分值的起始转录位点,将gpd启动子分成gpd-Tre1(885 bp)、gpd-Tre2(708 bp)、gpd-Tre3(466 bp)3段区域,分别与多功能纤维素基因(mfc)构建表达载体pgTrc1-mfc、pgTre2- mfc和pgTre3- mfc.拟共转化子酶活发酵试验结果发现3个表达载体的转化子均能检测到多功能纤维素酶活,转化子T1-2包含gpd-Tre1启动子大片段,整体酶活最高,CMC酶活为14.12 U/mL,比出发菌株Tr01提高34.3％,比工程菌株yLes3提高25.7％,木聚糖酶活为34.8 U/mL,比Tr01酶活提高26.3％,略低于yLes3.3个启动子片段均具有表达活性,相比之下885 bp的大片段gpd启动子表达活性更高.
이용반향장거리PCR기술종은이(Tremella fuciformis)아포gpd기인출발극륭상유gpd계동자서렬,장예측적gpd계동자편단여다공능섬유소기인(mfc)련접구건표체재체,여조매소항성질립pBgGl-hph공전화은이아포,대의공전화자진행매활발효시험.결과표명:4륜반향장거리PCR극륭득도료1761 bp적상유서렬,경예측계동자락재상유1000 bp좌우구역내,포함량개고분치적기시전록위점,장gpd계동자분성gpd-Tre1(885 bp)、gpd-Tre2(708 bp)、gpd-Tre3(466 bp)3단구역,분별여다공능섬유소기인(mfc)구건표체재체pgTrc1-mfc、pgTre2- mfc화pgTre3- mfc.의공전화자매활발효시험결과발현3개표체재체적전화자균능검측도다공능섬유소매활,전화자T1-2포함gpd-Tre1계동자대편단,정체매활최고,CMC매활위14.12 U/mL,비출발균주Tr01제고34.3％,비공정균주yLes3제고25.7％,목취당매활위34.8 U/mL,비Tr01매활제고26.3％,략저우yLes3.3개계동자편단균구유표체활성,상비지하885 bp적대편단gpd계동자표체활성경고.