南京林业大学学报（自然科学版）
南京林業大學學報（自然科學版）
남경임업대학학보（자연과학판）
JOURNAL OF NANJING FORESTRY UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)
2012年
5期
42-46
,共5页
丁信誉%邱帅%席梦利%施季森
丁信譽%邱帥%席夢利%施季森
정신예%구수%석몽리%시계삼
东方百合%ISSR-PCR%正交设计
東方百閤%ISSR-PCR%正交設計
동방백합%ISSR-PCR%정교설계
以东方百合‘Constanta’和‘Sorbonne’以及9份‘Constanta’בSorbonne’的F1代为试材,采用改良的CTAB法提取百合嫩叶DNA,利用正交设计L16 (45)对东方百合ISSR - PCR反应体系的Taq酶、Mg2+、模板DNA、dNTPs和引物5种因素在4个水平上进行优化试验,采用直观分析结合方差分析评价扩增结果.最终获得的最佳反应体系为:在20μL反应体系中,含Taq DNA聚合酶0.5 μmol/min、Mg2+1.75 mmol/mL、模板DNA 40～100 ng、dNTPs 0.15 mmoL/mL、引物0.6 μmol/L、10×PCR Buffer 2μL,不足部分以ddH2O补足.在获得最佳反应体系的基础上采用单因素实验确定了引物最佳退火温度范围为55～45℃,最佳循环次数为30次以及延伸时间为1.5 min.应用该优化的反应体系,对‘Constanta’和‘Sorbonne’以及9份‘Constanta’בSorbonne’的F1代DNA进行ISSR - PCR扩增,结果显示优化的反应体系具有较高的扩增稳定性.
以東方百閤‘Constanta’和‘Sorbonne’以及9份‘Constanta’בSorbonne’的F1代為試材,採用改良的CTAB法提取百閤嫩葉DNA,利用正交設計L16 (45)對東方百閤ISSR - PCR反應體繫的Taq酶、Mg2+、模闆DNA、dNTPs和引物5種因素在4箇水平上進行優化試驗,採用直觀分析結閤方差分析評價擴增結果.最終穫得的最佳反應體繫為:在20μL反應體繫中,含Taq DNA聚閤酶0.5 μmol/min、Mg2+1.75 mmol/mL、模闆DNA 40～100 ng、dNTPs 0.15 mmoL/mL、引物0.6 μmol/L、10×PCR Buffer 2μL,不足部分以ddH2O補足.在穫得最佳反應體繫的基礎上採用單因素實驗確定瞭引物最佳退火溫度範圍為55～45℃,最佳循環次數為30次以及延伸時間為1.5 min.應用該優化的反應體繫,對‘Constanta’和‘Sorbonne’以及9份‘Constanta’בSorbonne’的F1代DNA進行ISSR - PCR擴增,結果顯示優化的反應體繫具有較高的擴增穩定性.
이동방백합‘Constanta’화‘Sorbonne’이급9빈‘Constanta’בSorbonne’적F1대위시재,채용개량적CTAB법제취백합눈협DNA,이용정교설계L16 (45)대동방백합ISSR - PCR반응체계적Taq매、Mg2+、모판DNA、dNTPs화인물5충인소재4개수평상진행우화시험,채용직관분석결합방차분석평개확증결과.최종획득적최가반응체계위:재20μL반응체계중,함Taq DNA취합매0.5 μmol/min、Mg2+1.75 mmol/mL、모판DNA 40～100 ng、dNTPs 0.15 mmoL/mL、인물0.6 μmol/L、10×PCR Buffer 2μL,불족부분이ddH2O보족.재획득최가반응체계적기출상채용단인소실험학정료인물최가퇴화온도범위위55～45℃,최가순배차수위30차이급연신시간위1.5 min.응용해우화적반응체계,대‘Constanta’화‘Sorbonne’이급9빈‘Constanta’בSorbonne’적F1대DNA진행ISSR - PCR확증,결과현시우화적반응체계구유교고적확증은정성.
