中华泌尿外科杂志
中華泌尿外科雜誌
중화비뇨외과잡지
CHINESE JOURNAL OF UROLOGY
2012年
7期
549-553
,共5页
王金辉%张慕淳%李霄%齐延新%刘广臣%孙丹丹%金宁一
王金輝%張慕淳%李霄%齊延新%劉廣臣%孫丹丹%金寧一
왕금휘%장모순%리소%제연신%류엄신%손단단%금저일
前列腺癌%凋亡素%重组腺病毒%凋亡
前列腺癌%凋亡素%重組腺病毒%凋亡
전렬선암%조망소%중조선병독%조망
Prostatic cancer%Apoptin%Recombinant adenovirus%Apoptosis
目的 探讨结合肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑癌基因Apoptin的腺病毒AdhTERTp-E1 a-A poptin (Ad-VT)对前列腺癌PC-3细胞的抑制作用. 方法 于96孔板内制备前列腺癌PC-3单层细胞(5×103个/孔),分别用100个感染复数(multiplicity of infection,M OI)、10 MOI和1 M0I的重组腺病毒Ad-VT、Ad-CMV-Apoptin(Ad-VP3)、Ad-hTERTp-El a-EGFP (Ad-GT)和Ad-CMV-EGFP(Ad-EGFP)进行感染,以未感染孔为对照,每个剂量设3个复孔.采用96 h噻唑盐(MTT)法,检测重组腺病毒对PC-3细胞的抑制作用.于6孔板制备PC-3单层细胞(1 × 106个/孔),分别用100 MOI的Ad-VT、Ad-VP3、Ad-GT和Ad-EGFP感染PC-3细胞,培养48 h后,分别应用AO/EB染色法、DAPI染色法、Annexin V检测法对PC-3细胞进行染色,在显微镜下观察细胞形态,分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式；应用Caspase检测法对PC-3细胞提取总蛋白,检测Caspase酶活性,分析Ad-VT对PC-3细胞的抑制方式. 结果 MTT法结果显示除Ad-EGFP外,Ad-VT、Ad-VP3和Ad-GT均 不同程度地表现出对PC-3细胞的抑制作用,其中Ad-VT、Ad-GT的抑制作用强于Ad-VP3,差异有统计学意义(P＜0.05)；培养48、72、96 h,随着MOI的增高,Ad-VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定剂量效应关系趋势,感染剂量为100 MOI时,Ad-VT对PC-3细胞的抑制作用具有一定时间效应关系趋势.通过AO/EB、DAPI、Annexin V检测法和Caspase酶活性检测结果显示,Ad-VT可通过诱导PC-3细胞的凋亡抑制PC-3细胞的增殖.其中AO/EB染色可观测到经Ad-VT感染的PC-3细胞呈现橘红色；DAPI染色可观测到经Ad-VT感染的PC-3细胞细胞核呈现亮蓝色,且存在核内物质碎裂；Annexin V检测法可观测到经Ad-VT感染的PC-3细胞出现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加等凋亡特征；Caspase检测结果显示Ad-VT可明显上调Caspase2、3、6、8、9酶的活性. 结论 结合肿瘤特异性启动子hTERTp和特异性抑癌基因Apoptin的腺病毒Ad-VT通过细胞凋亡能有效地抑制前列腺癌PC-3细胞的生长.
目的 探討結閤腫瘤特異性啟動子hTERTp和特異性抑癌基因Apoptin的腺病毒AdhTERTp-E1 a-A poptin (Ad-VT)對前列腺癌PC-3細胞的抑製作用. 方法 于96孔闆內製備前列腺癌PC-3單層細胞(5×103箇/孔),分彆用100箇感染複數(multiplicity of infection,M OI)、10 MOI和1 M0I的重組腺病毒Ad-VT、Ad-CMV-Apoptin(Ad-VP3)、Ad-hTERTp-El a-EGFP (Ad-GT)和Ad-CMV-EGFP(Ad-EGFP)進行感染,以未感染孔為對照,每箇劑量設3箇複孔.採用96 h噻唑鹽(MTT)法,檢測重組腺病毒對PC-3細胞的抑製作用.于6孔闆製備PC-3單層細胞(1 × 106箇/孔),分彆用100 MOI的Ad-VT、Ad-VP3、Ad-GT和Ad-EGFP感染PC-3細胞,培養48 h後,分彆應用AO/EB染色法、DAPI染色法、Annexin V檢測法對PC-3細胞進行染色,在顯微鏡下觀察細胞形態,分析Ad-VT對PC-3細胞的抑製方式；應用Caspase檢測法對PC-3細胞提取總蛋白,檢測Caspase酶活性,分析Ad-VT對PC-3細胞的抑製方式. 結果 MTT法結果顯示除Ad-EGFP外,Ad-VT、Ad-VP3和Ad-GT均 不同程度地錶現齣對PC-3細胞的抑製作用,其中Ad-VT、Ad-GT的抑製作用彊于Ad-VP3,差異有統計學意義(P＜0.05)；培養48、72、96 h,隨著MOI的增高,Ad-VT對PC-3細胞的抑製作用具有一定劑量效應關繫趨勢,感染劑量為100 MOI時,Ad-VT對PC-3細胞的抑製作用具有一定時間效應關繫趨勢.通過AO/EB、DAPI、Annexin V檢測法和Caspase酶活性檢測結果顯示,Ad-VT可通過誘導PC-3細胞的凋亡抑製PC-3細胞的增殖.其中AO/EB染色可觀測到經Ad-VT感染的PC-3細胞呈現橘紅色；DAPI染色可觀測到經Ad-VT感染的PC-3細胞細胞覈呈現亮藍色,且存在覈內物質碎裂；Annexin V檢測法可觀測到經Ad-VT感染的PC-3細胞齣現燐脂膜外翻、細胞覈皺縮、細胞膜通透性增加等凋亡特徵；Caspase檢測結果顯示Ad-VT可明顯上調Caspase2、3、6、8、9酶的活性. 結論 結閤腫瘤特異性啟動子hTERTp和特異性抑癌基因Apoptin的腺病毒Ad-VT通過細胞凋亡能有效地抑製前列腺癌PC-3細胞的生長.
목적 탐토결합종류특이성계동자hTERTp화특이성억암기인Apoptin적선병독AdhTERTp-E1 a-A poptin (Ad-VT)대전렬선암PC-3세포적억제작용. 방법 우96공판내제비전렬선암PC-3단층세포(5×103개/공),분별용100개감염복수(multiplicity of infection,M OI)、10 MOI화1 M0I적중조선병독Ad-VT、Ad-CMV-Apoptin(Ad-VP3)、Ad-hTERTp-El a-EGFP (Ad-GT)화Ad-CMV-EGFP(Ad-EGFP)진행감염,이미감염공위대조,매개제량설3개복공.채용96 h새서염(MTT)법,검측중조선병독대PC-3세포적억제작용.우6공판제비PC-3단층세포(1 × 106개/공),분별용100 MOI적Ad-VT、Ad-VP3、Ad-GT화Ad-EGFP감염PC-3세포,배양48 h후,분별응용AO/EB염색법、DAPI염색법、Annexin V검측법대PC-3세포진행염색,재현미경하관찰세포형태,분석Ad-VT대PC-3세포적억제방식；응용Caspase검측법대PC-3세포제취총단백,검측Caspase매활성,분석Ad-VT대PC-3세포적억제방식. 결과 MTT법결과현시제Ad-EGFP외,Ad-VT、Ad-VP3화Ad-GT균 불동정도지표현출대PC-3세포적억제작용,기중Ad-VT、Ad-GT적억제작용강우Ad-VP3,차이유통계학의의(P＜0.05)；배양48、72、96 h,수착MOI적증고,Ad-VT대PC-3세포적억제작용구유일정제량효응관계추세,감염제량위100 MOI시,Ad-VT대PC-3세포적억제작용구유일정시간효응관계추세.통과AO/EB、DAPI、Annexin V검측법화Caspase매활성검측결과현시,Ad-VT가통과유도PC-3세포적조망억제PC-3세포적증식.기중AO/EB염색가관측도경Ad-VT감염적PC-3세포정현귤홍색；DAPI염색가관측도경Ad-VT감염적PC-3세포세포핵정현량람색,차존재핵내물질쇄렬；Annexin V검측법가관측도경Ad-VT감염적PC-3세포출현린지막외번、세포핵추축、세포막통투성증가등조망특정；Caspase검측결과현시Ad-VT가명현상조Caspase2、3、6、8、9매적활성. 결론 결합종류특이성계동자hTERTp화특이성억암기인Apoptin적선병독Ad-VT통과세포조망능유효지억제전렬선암PC-3세포적생장.
Objective To investigate the inhibition effects of an hTERT-promoter-dependent oncolytic adenovirus Ad-VT that expresses apoptin on human prostatic carcinoma cell PC-3. Methods MTT assay was used to measure viability of PC-3 cell which was infected by recombinant adenovirus.The viability was measured at time points of 12,24,36,48,60,72,84 and 96 h after infection.AO/EB staining,DAPI staining,Annexin V assay were used to investigate the lethal effect and style of Ad-VT on PC-3 cell in vitro.The Caspases were measured by whole cell extraction of PC-3 cells 48hrs after infection. Results Ad-VT,Ad-VP3 and Ad-GT inhibited the proliferation of PC-3 cell in vitro.Ad-VT and Ad-GT were more effective than Ad-VP3 on cell growth,P ＜ 0.05.At 48,72,96 h time points,the inhibition effect of Ad-VT on PC-3 cell exhibited a dose related manner.When infection at MOI 100,the inhibition effect of Ad-VT on PC-3 cells exhibited time related manner.The AO/EB staining,DAPI staining,Annexin V assay,Annexin V assays and Caspase assays showed that Ad-VT inhibited the proliferation of PC-3 cells by inducing apoptosis of prostate cancer cells,Loss of cytoplasmic membrane integrity. Conclusions The hTERT-promoterdependent oncolytic adenovirus Ad-VT could effectively suppress prostate cancer cells PC-3 growth.
