中华肝脏病杂志
中華肝髒病雜誌
중화간장병잡지
CHINESE JOURNAL OF HEPATOLOGY
2006年
2期
101-104
,共4页
夏剑波%张振华%田拥军%孟忠吉%喻植群%赵西平%杨东亮
夏劍波%張振華%田擁軍%孟忠吉%喻植群%趙西平%楊東亮
하검파%장진화%전옹군%맹충길%유식군%조서평%양동량
癌,肝细胞%肿瘤标记,生物学%人宫颈癌基因%多克隆抗体
癌,肝細胞%腫瘤標記,生物學%人宮頸癌基因%多剋隆抗體
암,간세포%종류표기,생물학%인궁경암기인%다극륭항체
目的构建表达截短型人宫颈癌基因(HCCR)-1蛋白的质粒,并进行原核表达、多克隆抗体制备.方法用逆转录聚合酶链反应法从HepG2细胞中扩增HCCR-1167～360cDNA,将其克隆到原核表达载体pRSET-B上,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS内进行诱导表达.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,并采用酶联免疫吸附试验、Western blot及免疫组织化学检测抗体的灵敏度和特异性.结果成功地构建了表达HCCR-1167～360蛋白的质粒,原核表达后纯化得到了分子量约为2.70×104的目的蛋白,用之免疫BALB/c小鼠获得了高效价的特异性多克隆抗体.结论所获得的重组HCCR-1167～360蛋白纯度高,免疫原性强.获得的抗HCCR-1167～360多克隆抗体有较高的效价和较好的特异性,为HCCR的临床检测和研究奠定了基础.
目的構建錶達截短型人宮頸癌基因(HCCR)-1蛋白的質粒,併進行原覈錶達、多剋隆抗體製備.方法用逆轉錄聚閤酶鏈反應法從HepG2細胞中擴增HCCR-1167～360cDNA,將其剋隆到原覈錶達載體pRSET-B上,在大腸桿菌BL21(DE3)pLysS內進行誘導錶達.用純化的重組蛋白免疫BALB/c小鼠製備多剋隆抗體,併採用酶聯免疫吸附試驗、Western blot及免疫組織化學檢測抗體的靈敏度和特異性.結果成功地構建瞭錶達HCCR-1167～360蛋白的質粒,原覈錶達後純化得到瞭分子量約為2.70×104的目的蛋白,用之免疫BALB/c小鼠穫得瞭高效價的特異性多剋隆抗體.結論所穫得的重組HCCR-1167～360蛋白純度高,免疫原性彊.穫得的抗HCCR-1167～360多剋隆抗體有較高的效價和較好的特異性,為HCCR的臨床檢測和研究奠定瞭基礎.
목적구건표체절단형인궁경암기인(HCCR)-1단백적질립,병진행원핵표체、다극륭항체제비.방법용역전록취합매련반응법종HepG2세포중확증HCCR-1167～360cDNA,장기극륭도원핵표체재체pRSET-B상,재대장간균BL21(DE3)pLysS내진행유도표체.용순화적중조단백면역BALB/c소서제비다극륭항체,병채용매련면역흡부시험、Western blot급면역조직화학검측항체적령민도화특이성.결과성공지구건료표체HCCR-1167～360단백적질립,원핵표체후순화득도료분자량약위2.70×104적목적단백,용지면역BALB/c소서획득료고효개적특이성다극륭항체.결론소획득적중조HCCR-1167～360단백순도고,면역원성강.획득적항HCCR-1167～360다극륭항체유교고적효개화교호적특이성,위HCCR적림상검측화연구전정료기출.
