CAJ | 학술논문

目的探讨儿童骨髓间质干细胞诱导分化为神经干细胞及神经细胞的方法及生物学特征,为将来进一步研究及利用其实验治疗小儿脊髓栓系综合征及其他神经系统疾病动物模型奠定基础.方法取健康儿童骨髓离心初步分离骨髓间质干细胞,在α-MEM培养基中进行无分化培养12代进一步纯化扩增,加入预诱导液、诱导液进行定向诱导分化,逐日观察细胞形态变化,采用免疫组织化学技术对诱导后的细胞进行神经干细胞特异性抗原nestin、神经丝蛋白β-tublin Ш和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的定性检测,观察其表达情况;并采用RT-PCR技术对不同时段神经干细胞特异性抗原nestin和神经生长因子受体Trk B (neurotrophic receptor tyrosine kinase B,Trk B)mRNA的表达进行检测,用上述两种技术手段,从不同角度和层面验证和初步探索BSMCs定向诱导分化为神经组织样细胞的细胞生物学和分子生物学特征.结果骨髓间质干细胞经过7 d体外诱导,大约有35%的细胞发生形态学变化.免疫组化结果显示,细胞形态逐步发生变化并最终形成神经样的细胞,在诱导后30 min表达神经干细胞特异性标志nestin抗原、7 d时分别表达神经元特异性标志β-tublinⅢ抗原和星形胶质细胞特异性标志GFAP抗原.RT-PCR检测结果也表明,被诱导后5.5 h在mRNA水平表达nestin,在6 d时消失;而神经生长因子受体TrkB mRNA在诱导5.5 h、6 d时均表达.结论经离心及12代传代初步分离纯化的儿童骨髓间质干细胞在合适的诱导剂作用下体外可定向分化成神经元和神经胶质细胞.为进一步研究其生物学特性或探索治疗小儿脊髓栓系综合征及其他神经系统疾病动物模型提供基础和种子细胞.
목적탐토인동골수간질간세포유도분화위신경간세포급신경세포적방법급생물학특정,위장래진일보연구급이용기실험치료소인척수전계종합정급기타신경계통질병동물모형전정기출.방법취건강인동골수리심초보분리골수간질간세포,재α-MEM배양기중진행무분화배양12대진일보순화확증,가입예유도액、유도액진행정향유도분화,축일관찰세포형태변화,채용면역조직화학기술대유도후적세포진행신경간세포특이성항원nestin、신경사단백β-tublin Ш화효질섬유산성단백(GFAP)표체적정성검측,관찰기표체정황;병채용RT-PCR기술대불동시단신경간세포특이성항원nestin화신경생장인자수체Trk B (neurotrophic receptor tyrosine kinase B,Trk B)mRNA적표체진행검측,용상술량충기술수단,종불동각도화층면험증화초보탐색BSMCs정향유도분화위신경조직양세포적세포생물학화분자생물학특정.결과골수간질간세포경과7 d체외유도,대약유35%적세포발생형태학변화.면역조화결과현시,세포형태축보발생변화병최종형성신경양적세포,재유도후30 min표체신경간세포특이성표지nestin항원、7 d시분별표체신경원특이성표지β-tublinⅢ항원화성형효질세포특이성표지GFAP항원.RT-PCR검측결과야표명,피유도후5.5 h재mRNA수평표체nestin,재6 d시소실;이신경생장인자수체TrkB mRNA재유도5.5 h、6 d시균표체.결론경리심급12대전대초보분리순화적인동골수간질간세포재합괄적유도제작용하체외가정향분화성신경원화신경효질세포.위진일보연구기생물학특성혹탐색치료소인척수전계종합정급기타신경계통질병동물모형제공기출화충자세포.