CAJ | 학술논문

目的:建立一种新的荧光标记的钠离子-葡萄糖协同转运蛋白2(sodium-glucose cotransporter 2,SGLT2)葡萄糖转运的测定方法.方法:合成人全长SGLT2 cDNA,构建pIRES2-EGFP-SGLT2重组质粒,酶切鉴定并测序验证其构建的正确性.瞬时转染HEK293细胞后,构建SGLT2高表达细胞株;采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪检测其转染效率及转录活性,Western Blot法检测目的蛋白SGLT2表达情况.以荧光标记的脱氧葡萄糖2-NBDG作为示踪剂,应用流式细胞术检测SGLT2对葡萄糖的转运活性.结果:构建的pIRES2-EGFP-SGLT2质粒经酶切鉴定、测序证明质粒构建正确.该质粒转染HEK293细胞后,与未转染组相比,转染组细胞绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达明显增加(P＜0.01).与空载体pIRES2 -EGFP转染组相比,重组质粒转染组SGLT2蛋白表达明显增加(P＜0.05)；而未转染组与空载体转染组SGLT2蛋白表达无明显差异.SGLT2转运试验结果显示,转染组细胞对2-NBDG的钠离子依赖性摄取率较未转染组明显升高(P＜0.01).结论:成功构建并应用SGLT2真核表达质粒,建立了一种新的荧光示踪的SGLT2葡萄糖转运活性的测定方法.
목적:건립일충신적형광표기적납리자-포도당협동전운단백2(sodium-glucose cotransporter 2,SGLT2)포도당전운적측정방법.방법:합성인전장SGLT2 cDNA,구건pIRES2-EGFP-SGLT2중조질립,매절감정병측서험증기구건적정학성.순시전염HEK293세포후,구건SGLT2고표체세포주;채용격광공취초소묘현미경、류식세포의검측기전염효솔급전록활성,Western Blot법검측목적단백SGLT2표체정황.이형광표기적탈양포도당2-NBDG작위시종제,응용류식세포술검측SGLT2대포도당적전운활성.결과:구건적pIRES2-EGFP-SGLT2질립경매절감정、측서증명질립구건정학.해질립전염HEK293세포후,여미전염조상비,전염조세포록색형광단백(green fluorescent protein,GFP)표체명현증가(P＜0.01).여공재체pIRES2 -EGFP전염조상비,중조질립전염조SGLT2단백표체명현증가(P＜0.05)；이미전염조여공재체전염조SGLT2단백표체무명현차이.SGLT2전운시험결과현시,전염조세포대2-NBDG적납리자의뢰성섭취솔교미전염조명현승고(P＜0.01).결론:성공구건병응용SGLT2진핵표체질립,건립료일충신적형광시종적SGLT2포도당전운활성적측정방법.