CAJ | 학술논문

目的制备兔抗16种鸟类的二级抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,为鸟类血清学检测系统的建立提供工具.方法采用水稀释法粗纯抗体后,再利用改良的饱和硫酸铵分级沉淀法,或亲和层析结合饱和硫酸铵沉淀法,或饱和硫酸铵沉淀法结合SDS-PAGE凝胶切胶纯化的方法进一步纯化鸟类的IgY,利用纯化的IgY免疫大耳白兔制备抗血清,用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗鸟类的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗鸟类的二级抗体进行辣根过氧化物酶标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blots考察标记抗体的特异性.结果纯化了灰雁、鸬鹚、鸵鸟、小鹈、鸽子、鹅、孔雀、鹌鹑、贵妃鸡、草鹭、夜鹭、赤嘴潜鸭、燕鸥、长脚鹬、虎皮鹦鹉、翘鼻麻鸭等16种鸟类的IgY,免疫双扩散法测定兔抗这16种鸟类的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗灰雁IgY、兔抗鸬鹚IgY、兔抗鸵鸟IgY、兔抗小鹈IgY、兔抗鸽子IgY、兔抗鹅IgY、兔抗孔雀IgY、兔抗鹌鹑IgY、兔抗贵妃鸡IgY、兔抗草鹭IgY、兔抗夜鹭IgY、兔抗赤嘴潜鸭IgY、兔抗燕鸥IgY、兔抗长脚鹬IgY、兔抗虎皮鹦鹉IgY、兔抗翘鼻麻鸭IgY等16种兔抗鸟类IgY的二级抗体进行了辣根过氧化物酶标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶800～80000左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性.结论成功制备了辣根过氧化物酶标记的兔抗16种鸟类的二级抗体,为鸟类血清学检测体系的建立提供了工具.
목적 제비토항16충조류적이급항체,병진행랄근과양화물매표기,위조류혈청학검측계통적건립제공공구.방법 채용수희석법조순항체후,재이용개량적포화류산안분급침정법,혹친화층석결합포화류산안침정법,혹포화류산안침정법결합SDS-PAGE응효절효순화적방법진일보순화조류적IgY,이용순화적IgY면역대이백토제비항혈청,용면역쌍확산래검측항혈청적효개,병용Protein A친화층석적방법래순화토항조류적이급항체,채용간역과전산납법대순화적토항조류적이급항체진행랄근과양화물매표기,통과ELISA방법측정표기항체적효개,병이용Western blots고찰표기항체적특이성.결과 순화료회안、로자、타조、소제、합자、아、공작、암순、귀비계、초로、야로、적취잠압、연구、장각휼、호피앵무、교비마압등16충조류적IgY,면역쌍확산법측정토항저16충조류적항혈청효개균체도1∶32,병대순화적토항회안IgY、토항로자IgY、토항타조IgY、토항소제IgY、토항합자IgY、토항아IgY、토항공작IgY、토항암순IgY、토항귀비계IgY、토항초로IgY、토항야로IgY、토항적취잠압IgY、토항연구IgY、토항장각휼IgY、토항호피앵무IgY、토항교비마압IgY등16충토항조류IgY적이급항체진행료랄근과양화물매표기,ELISA측정표기항체적효개체도1∶800～80000좌우,Western blots현시표기항체구유흔호적특이성.결론 성공제비료랄근과양화물매표기적토항16충조류적이급항체,위조류혈청학검측체계적건립제공료공구.