中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2003年
5期
585-589
,共5页
郭小荑%邓宇斌%陆才生%李树浓
郭小荑%鄧宇斌%陸纔生%李樹濃
곽소이%산우빈%륙재생%리수농
T淋巴细胞,细胞毒性%免疫球蛋白类%腺病毒载体%基因疗法
T淋巴細胞,細胞毒性%免疫毬蛋白類%腺病毒載體%基因療法
T림파세포,세포독성%면역구단백류%선병독재체%기인요법
目的:构建含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体,为下一步在动物模型体内表达和基因治疗提供基础.方法: 自行设计一对分别含有BglⅡ及HindⅢ酶切位点的CTLA4Ig基因上下游引物,以质粒PCDNA3.0/CTLA4Ig为模板,通过PCR扩增获得CTLA4Ig基因全部序列.片段回收以后经BglⅡ及HindⅢ双酶切,定向插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV的启动子下游BglⅡ及HindⅢ位点之间,获得重组质粒pAdTrack-CTLA4Ig.通过BglⅡ/HindⅢ双酶切、PCR及插入片段测序鉴定后,将正确重组体pAdTrack-CTLA4Ig与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化BJ5183细菌.同源重组后用选择性培养基筛选阳性克隆,提取质粒用脂质体介导转染293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达及PCR扩增目的基因等方法鉴定重组的腺病毒.结果:成功构建了含有CTLA4Ig基因的重组腺病毒,病毒滴度为1.65×1012PFU/L. 结论: 该重组腺病毒的构建为下一步研究其在哺乳动物细胞内表达、研究CTLA4Ig的生物学活性及移植排斥、自身免疫病的基因治疗提供了一定的基础.
目的:構建含有CTLA4Ig基因的重組腺病毒載體,為下一步在動物模型體內錶達和基因治療提供基礎.方法: 自行設計一對分彆含有BglⅡ及HindⅢ酶切位點的CTLA4Ig基因上下遊引物,以質粒PCDNA3.0/CTLA4Ig為模闆,通過PCR擴增穫得CTLA4Ig基因全部序列.片段迴收以後經BglⅡ及HindⅢ雙酶切,定嚮插入到腺病毒穿梭質粒pAdTrack-CMV的啟動子下遊BglⅡ及HindⅢ位點之間,穫得重組質粒pAdTrack-CTLA4Ig.通過BglⅡ/HindⅢ雙酶切、PCR及插入片段測序鑒定後,將正確重組體pAdTrack-CTLA4Ig與腺病毒骨架質粒pAdEasy-1共轉化BJ5183細菌.同源重組後用選擇性培養基篩選暘性剋隆,提取質粒用脂質體介導轉染293細胞,通過觀察綠色熒光蛋白(GFP)的錶達及PCR擴增目的基因等方法鑒定重組的腺病毒.結果:成功構建瞭含有CTLA4Ig基因的重組腺病毒,病毒滴度為1.65×1012PFU/L. 結論: 該重組腺病毒的構建為下一步研究其在哺乳動物細胞內錶達、研究CTLA4Ig的生物學活性及移植排斥、自身免疫病的基因治療提供瞭一定的基礎.
목적:구건함유CTLA4Ig기인적중조선병독재체,위하일보재동물모형체내표체화기인치료제공기출.방법: 자행설계일대분별함유BglⅡ급HindⅢ매절위점적CTLA4Ig기인상하유인물,이질립PCDNA3.0/CTLA4Ig위모판,통과PCR확증획득CTLA4Ig기인전부서렬.편단회수이후경BglⅡ급HindⅢ쌍매절,정향삽입도선병독천사질립pAdTrack-CMV적계동자하유BglⅡ급HindⅢ위점지간,획득중조질립pAdTrack-CTLA4Ig.통과BglⅡ/HindⅢ쌍매절、PCR급삽입편단측서감정후,장정학중조체pAdTrack-CTLA4Ig여선병독골가질립pAdEasy-1공전화BJ5183세균.동원중조후용선택성배양기사선양성극륭,제취질립용지질체개도전염293세포,통과관찰록색형광단백(GFP)적표체급PCR확증목적기인등방법감정중조적선병독.결과:성공구건료함유CTLA4Ig기인적중조선병독,병독적도위1.65×1012PFU/L. 결론: 해중조선병독적구건위하일보연구기재포유동물세포내표체、연구CTLA4Ig적생물학활성급이식배척、자신면역병적기인치료제공료일정적기출.
