中国组织工程研究与临床康复
中國組織工程研究與臨床康複
중국조직공정연구여림상강복
JOURNAL OF CLINICAL REHABILITATIVE TISSUE ENGINEERING RESEARCH
2009年
20期
3886-3889
,共4页
潘静坤%赵卉%田磊%崔忻%高宇红%薛毅珑
潘靜坤%趙卉%田磊%崔忻%高宇紅%薛毅瓏
반정곤%조훼%전뢰%최흔%고우홍%설의롱
人血管抑素%人内皮抑素%基因工程细胞%鸡胚尿囊膜%血管新生
人血管抑素%人內皮抑素%基因工程細胞%鷄胚尿囊膜%血管新生
인혈관억소%인내피억소%기인공정세포%계배뇨낭막%혈관신생
背景:以往实验构建了可持续分泌人血管抑素和内皮抑素的基因工程细胞,即人血管抑素/293细胞和人内皮抑素293细胞,并已证明可持续分泌人血管抑素蛋白和人内皮抑素蛋白.但尚不了解其分泌物是否能发挥血管生成的抑制作用.目的:观察以基因工程技术构建的人血管抑素/293细胞和人内皮抑素,293细胞对鸡胍尿囊膜血管新生的抑制效应.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-0612007-01在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室完成.材料:Hek/293细胞为人胚胎肾细胞,由解放军军事医学科学院提供.人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞由课题组前期构建.SPF级鸡胚购自北京维通利华实验动物有限公司.方法:将鸡胚消毒后,置于37℃无菌恒温箱中孵育5 d,在距胚头1 cm两条卵黄静脉之间的卵壳投影部位磨切暴露尿囊膜,制成假气室,用无菌滤纸封闭窗口.制成鸡胚尿囊膜模型,备用.用灭菌蒸馏水配制体积分数为0.5%甲基纤维素溶液,制成甲基纤维素小杯.卵壳开窗后第3天,分别吸取浓缩的293细胞、人血管抑素/293细胞、人内皮抑素/293细胞培养上清液各20 μ L.或人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞培养上清液各10 μ L,加于甲基纤维素小杯中,将其置于鸡胚 尿囊膜的两条大血管之间的无血管区.主要观察指标:观察尿囊膜血管生成的变化.结果:共培养9 d时,与单纯293细胞上清液组相比,人血管抑素/293细胞上清液或人内皮抑素/293细胞上清液组,甲基纤维素小杯内及邻近区的鸡胚尿囊膜血管明显发育不良,血管分布稀疏,数量明显减少,其一级血管数量盟未明显减少,但其管径较细,而二级血管和二级以下的血管数量明显减少、管径明显变细,伸入尿囊膜边缘区的血管数量减少,管径明显变细.与人血管抑素/293细胞组或人内皮抑素/293细胞组相比,人血管抑素/293细胞+人内皮抑素/293细胞组的一级血管数量和管径未见明显变化,而其二级血管和三级以下血管数量明显减少,血管树消失.结论:人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞的分泌物对鸡胚尿囊膜的血管新生均具有明显的抑制作用,且联合用药抑制作用增强.
揹景:以往實驗構建瞭可持續分泌人血管抑素和內皮抑素的基因工程細胞,即人血管抑素/293細胞和人內皮抑素293細胞,併已證明可持續分泌人血管抑素蛋白和人內皮抑素蛋白.但尚不瞭解其分泌物是否能髮揮血管生成的抑製作用.目的:觀察以基因工程技術構建的人血管抑素/293細胞和人內皮抑素,293細胞對鷄胍尿囊膜血管新生的抑製效應.設計、時間及地點:隨機對照動物實驗,于2006-0612007-01在解放軍總醫院老年醫學研究所細胞生物學研究室完成.材料:Hek/293細胞為人胚胎腎細胞,由解放軍軍事醫學科學院提供.人血管抑素/293細胞和人內皮抑素/293細胞由課題組前期構建.SPF級鷄胚購自北京維通利華實驗動物有限公司.方法:將鷄胚消毒後,置于37℃無菌恆溫箱中孵育5 d,在距胚頭1 cm兩條卵黃靜脈之間的卵殼投影部位磨切暴露尿囊膜,製成假氣室,用無菌濾紙封閉窗口.製成鷄胚尿囊膜模型,備用.用滅菌蒸餾水配製體積分數為0.5%甲基纖維素溶液,製成甲基纖維素小杯.卵殼開窗後第3天,分彆吸取濃縮的293細胞、人血管抑素/293細胞、人內皮抑素/293細胞培養上清液各20 μ L.或人血管抑素/293細胞和人內皮抑素/293細胞培養上清液各10 μ L,加于甲基纖維素小杯中,將其置于鷄胚 尿囊膜的兩條大血管之間的無血管區.主要觀察指標:觀察尿囊膜血管生成的變化.結果:共培養9 d時,與單純293細胞上清液組相比,人血管抑素/293細胞上清液或人內皮抑素/293細胞上清液組,甲基纖維素小杯內及鄰近區的鷄胚尿囊膜血管明顯髮育不良,血管分佈稀疏,數量明顯減少,其一級血管數量盟未明顯減少,但其管徑較細,而二級血管和二級以下的血管數量明顯減少、管徑明顯變細,伸入尿囊膜邊緣區的血管數量減少,管徑明顯變細.與人血管抑素/293細胞組或人內皮抑素/293細胞組相比,人血管抑素/293細胞+人內皮抑素/293細胞組的一級血管數量和管徑未見明顯變化,而其二級血管和三級以下血管數量明顯減少,血管樹消失.結論:人血管抑素/293細胞和人內皮抑素/293細胞的分泌物對鷄胚尿囊膜的血管新生均具有明顯的抑製作用,且聯閤用藥抑製作用增彊.
배경:이왕실험구건료가지속분비인혈관억소화내피억소적기인공정세포,즉인혈관억소/293세포화인내피억소293세포,병이증명가지속분비인혈관억소단백화인내피억소단백.단상불료해기분비물시부능발휘혈관생성적억제작용.목적:관찰이기인공정기술구건적인혈관억소/293세포화인내피억소,293세포대계고뇨낭막혈관신생적억제효응.설계、시간급지점:수궤대조동물실험,우2006-0612007-01재해방군총의원노년의학연구소세포생물학연구실완성.재료:Hek/293세포위인배태신세포,유해방군군사의학과학원제공.인혈관억소/293세포화인내피억소/293세포유과제조전기구건.SPF급계배구자북경유통리화실험동물유한공사.방법:장계배소독후,치우37℃무균항온상중부육5 d,재거배두1 cm량조란황정맥지간적란각투영부위마절폭로뇨낭막,제성가기실,용무균려지봉폐창구.제성계배뇨낭막모형,비용.용멸균증류수배제체적분수위0.5%갑기섬유소용액,제성갑기섬유소소배.란각개창후제3천,분별흡취농축적293세포、인혈관억소/293세포、인내피억소/293세포배양상청액각20 μ L.혹인혈관억소/293세포화인내피억소/293세포배양상청액각10 μ L,가우갑기섬유소소배중,장기치우계배 뇨낭막적량조대혈관지간적무혈관구.주요관찰지표:관찰뇨낭막혈관생성적변화.결과:공배양9 d시,여단순293세포상청액조상비,인혈관억소/293세포상청액혹인내피억소/293세포상청액조,갑기섬유소소배내급린근구적계배뇨낭막혈관명현발육불량,혈관분포희소,수량명현감소,기일급혈관수량맹미명현감소,단기관경교세,이이급혈관화이급이하적혈관수량명현감소、관경명현변세,신입뇨낭막변연구적혈관수량감소,관경명현변세.여인혈관억소/293세포조혹인내피억소/293세포조상비,인혈관억소/293세포+인내피억소/293세포조적일급혈관수량화관경미견명현변화,이기이급혈관화삼급이하혈관수량명현감소,혈관수소실.결론:인혈관억소/293세포화인내피억소/293세포적분비물대계배뇨낭막적혈관신생균구유명현적억제작용,차연합용약억제작용증강.
