畜牧兽医学报
畜牧獸醫學報
축목수의학보
2009年
1期
83-88
,共6页
曹轶梅%孙甲川%卢曾军%孙普%郭建宏%刘在新
曹軼梅%孫甲川%盧曾軍%孫普%郭建宏%劉在新
조질매%손갑천%로증군%손보%곽건굉%류재신
FMDV%衣壳蛋白基因P12A%杆状病毒%Sf9细胞%表达
FMDV%衣殼蛋白基因P12A%桿狀病毒%Sf9細胞%錶達
FMDV%의각단백기인P12A%간상병독%Sf9세포%표체
将Asia Ⅰ型FMDV全农壳蛋白P12A基因插入到带有蜂毒溶血肽信号序列的杆状病毒转移载体pMel-Bac中,构建重组转移载体pMel-P12A.然后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒.以感染复数(MOI)10的重组病毒感染Sf9细胞,72 h后收获细胞,经Western blotting、间接免疫荧光检测,结果表明P12A基因在昆虫细胞中获得表达,相对分子质最约82 ku,与预测蛋白大小一致,且能被FMDV阳性血清所识别.免疫荧光检测表明表达蛋白主要集中在细胞膜部分.夹心ELISA检测结果表明一部分表达蛋白分泌至培养基中,而有一部分蛋白仍在细胞中未能分泌.表达蛋白加入等量佐剂乳化后免疫豚鼠,间接ELISA检测结果表明豚鼠免疫后15 d即产生了特异性FMDV抗体.本研究为空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究进行了有益的探索.
將Asia Ⅰ型FMDV全農殼蛋白P12A基因插入到帶有蜂毒溶血肽信號序列的桿狀病毒轉移載體pMel-Bac中,構建重組轉移載體pMel-P12A.然後將含有目的基因的轉移載體與線性化的桿狀病毒DNA共轉染Sf9細胞,穫得重組桿狀病毒.以感染複數(MOI)10的重組病毒感染Sf9細胞,72 h後收穫細胞,經Western blotting、間接免疫熒光檢測,結果錶明P12A基因在昆蟲細胞中穫得錶達,相對分子質最約82 ku,與預測蛋白大小一緻,且能被FMDV暘性血清所識彆.免疫熒光檢測錶明錶達蛋白主要集中在細胞膜部分.夾心ELISA檢測結果錶明一部分錶達蛋白分泌至培養基中,而有一部分蛋白仍在細胞中未能分泌.錶達蛋白加入等量佐劑乳化後免疫豚鼠,間接ELISA檢測結果錶明豚鼠免疫後15 d即產生瞭特異性FMDV抗體.本研究為空衣殼的體外組裝及基因工程亞單位疫苗的研究進行瞭有益的探索.
장Asia Ⅰ형FMDV전농각단백P12A기인삽입도대유봉독용혈태신호서렬적간상병독전이재체pMel-Bac중,구건중조전이재체pMel-P12A.연후장함유목적기인적전이재체여선성화적간상병독DNA공전염Sf9세포,획득중조간상병독.이감염복수(MOI)10적중조병독감염Sf9세포,72 h후수획세포,경Western blotting、간접면역형광검측,결과표명P12A기인재곤충세포중획득표체,상대분자질최약82 ku,여예측단백대소일치,차능피FMDV양성혈청소식별.면역형광검측표명표체단백주요집중재세포막부분.협심ELISA검측결과표명일부분표체단백분비지배양기중,이유일부분단백잉재세포중미능분비.표체단백가입등량좌제유화후면역돈서,간접ELISA검측결과표명돈서면역후15 d즉산생료특이성FMDV항체.본연구위공의각적체외조장급기인공정아단위역묘적연구진행료유익적탐색.
