酵母双杂交相关方法的改良及应用
효모쌍잡교상관방법적개량급응용
The improvement of some methods involved in yeast two-hybrid experiments
  • 万方数据
    生物技术通讯 생물기술통신
    LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
    2003年 5期 372-374 ,共3页

    徐文琳%廖志勇%王春丽%余利红%王新兴%尹昭云%张成岗%钱令嘉

    서문림%료지용%왕춘려%여리홍%왕신흥%윤소운%장성강%전령가

    酵母双杂交%阳性克隆%筛选%PCR 酵母雙雜交%暘性剋隆%篩選%PCR
    효모쌍잡교%양성극륭%사선%PCR
    对酵母双杂交实验过程中较为耗时的阳性克隆鉴定过程进行改进,以期建立一种快速有效的鉴定方法.分别采用液氮冻融法、超声破碎法、渗透压破壁法以及煮沸裂解法裂解酵母细胞,获得质粒作为PCR模板,直接测序鉴定筛选到的相互作用蛋白.以液氮冻融法和超声破碎法裂解细胞获得的质粒为模板进行PCR,得到特异的产物,测序鉴定结果明确,与经典的鉴定方法相比效果相当,但更加经济快捷;而渗透压破壁法和煮沸裂解法则效果不好.说明前两种方法可代替常规方法用于阳性克隆的鉴定,从而加快酵母双杂交实验中大量阳性克隆的筛查工作.
    대효모쌍잡교실험과정중교위모시적양성극륭감정과정진행개진,이기건립일충쾌속유효적감정방법.분별채용액담동융법、초성파쇄법、삼투압파벽법이급자비렬해법렬해효모세포,획득질립작위PCR모판,직접측서감정사선도적상호작용단백.이액담동융법화초성파쇄법렬해세포획득적질립위모판진행PCR,득도특이적산물,측서감정결과명학,여경전적감정방법상비효과상당,단경가경제쾌첩;이삼투압파벽법화자비렬해법칙효과불호.설명전량충방법가대체상규방법용우양성극륭적감정,종이가쾌효모쌍잡교실험중대량양성극륭적사사공작.
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